药学本科《生物化学》实验七限制性内切酶酶切分析.pptxVIP

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2025-05-08 发布于四川
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药学本科《生物化学》实验七限制性内切酶酶切分析.pptx

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DNA的限制性内切酶酶切分析

酶切组分加入体积01（2人一组）ddH2O7ul0210×bufferEcoRI2ul03质粒DNA8ul04EcoRI3ul05盖紧，混匀，稍离心，37℃水浴反应1h06

限制性内切酶(RestrictionEndonuclease,RE):由细菌自身产生，能识别双链DNA分子中特定的碱基顺序，以内切方式水解核酸中的磷酸二酯键，产生粘性末端或平头末端。实验原理12

EcoRI的作用模式图:产生5?突出粘性末端**********GAATTC******************CTTAAG********5?3?5?3?EcoRI*********G*********CTTAA5?3?3?5?—OH—PAATTC*********G*********5?3?3?5?POH—

EcoRIBcl-2(1.9kb)pBS(2.96kb)pBS-Bcl-2(4.86kb)Bcl-2重组质粒的酶切模式图

点样:取4μl6×上样缓冲液加入20μl酶切产物.混匀后取10ul加到点样孔中。电泳：100V稳压进行电泳30分钟。观察结果：紫外分析仪上观察DNA存在处显亮绿色荧光条带010302

DNAMarker样品2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp2961bp1900bp点样孔1500bp3000bp5000bp

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