蛋白质的分离纯化和表征 .pptVIP

第1页，共28页，星期日，2025年，2月5日一蛋白质的酸碱性质蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。*蛋白质的等电点(isoelectricpoint,pI)当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。*蛋白质的两性电离第2页，共28页，星期日，2025年，2月5日第3页，共28页，星期日，2025年，2月5日大小(一)根据化学组成测定最低相对分子质量公式:最低相对分子质量=铁的原子量×100铁的百分含量二蛋白质分子的大小与形状第4页，共28页，星期日，2025年，2月5日（二）渗透压法测定相对分子质量公式:R:气体常数T:绝对温度C:溶质浓度(g/m3)实际是测定几个不同浓度的渗透压。第5页，共28页，星期日，2025年，2月5日(三)蛋白质的扩散和扩散系数扩散：由于浓度差引起的溶质分子的净迁移。菲克定律一：dm=-DAdcdtdxD：扩散系数。当浓度梯度为一个单位时，在一秒内通过1厘米2面积所扩散的溶质量。第6页，共28页，星期日，2025年，2月5日菲克定律二：测定扩散系数第7页，共28页，星期日，2025年，2月5日沉降速度法Mr=RTsD(1-Ｖρ)Ｖ:蛋白质的偏微比容S：沉降系数S值ρ：溶剂密度D：扩散系数(四)沉降分析法测定相对分子质量第8页，共28页，星期日，2025年，2月5日沉降平衡法Mr=2RTdln(c2/c1)(1-Ｖρ)Ｗ2(x22-x21)W:转头的角速度c2，c1：离转中心x1，x2处的蛋白质浓度第9页，共28页，星期日，2025年，2月5日(五)凝胶过滤法测定相对分子质量第10页，共28页，星期日，2025年，2月5日（六）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定

蛋白质分子质量每两个氨基酸残基结合一SDS分子后果：1掩盖了不同蛋白质间原有的电荷差别。2改变了蛋白质单体分子的构象。公式：第11页，共28页，星期日，2025年，2月5日形状X射线晶体结构分析第12页，共28页，星期日，2025年，2月5日三蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀(一)胶体性质蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。*蛋白质胶体稳定的因素颗粒表面电荷水化膜第13页，共28页，星期日，2025年，2月5日+++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜++++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉第14页，共28页，星期日，2025年，2月5日（二）蛋白质的沉淀在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。第15页，共28页，星期日，2025年，2月5日沉淀方法*盐析(saltprecipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。*有机溶剂深沉法如乙醇,丙酮等沉淀。第16页，共28页，星期日，2025年，2月5日*重金属盐沉淀法析金属离子*生物碱试剂和某些酸类沉淀法析生物碱*加热变性沉淀法析加热第17页，共28页，星期日，2025年，2月5日前处理组分级处理细分级处理四蛋白质分离纯化的一般原则第18页，共28页，星期日，2025年，2月5日根据分子大小不同透析、超过滤、梯度离心、凝胶过滤根据溶解度差别等电点沉淀、PH控制、蛋白质盐溶和盐析、有机溶剂、温度根据电荷不同电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管电泳、等电聚焦、层析聚焦、离子交换层