临床免疫学检验课件 第8章 酶免疫技术学习资料.pptVIP

第八章

酶免疫技术

第一节酶免疫技术的特点

主要试剂:酶标记的抗体或抗原酶标物特点：免疫学活性酶对底物的催化活性固相载体可作ELISA中载体的物质很多，最常用的是聚苯乙烯。ELISA载体的形状主要有三种：小试管、小珠和微量反应板。最常用的载体为微量反应板，专用于ELISA测定的产品也称为ELISA板，国际通用的标准板形是8×12的96孔式。良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间和同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大。因此每一批号的聚苯乙烯制品在使用前须检查其性能。常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG（一般为10ng/ml）包被ELISA板各孔后，每孔内加入适当稀释的酶标抗人IgG抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各读数在0.8左右。计算所有读数的平均值。所有单个读数与平均读数之差应小于10％。将抗原或抗体固相化的过程称为包被（coating）。如以聚苯乙烯ELISA板为载体，通常将抗原或抗体溶于缓冲液中，加于ELISA板孔中在4℃过夜，经清洗后即可应用。如果包被液中的蛋白质浓度过低，固相载体表面有可能被此蛋白质不完全覆盖，其后加入