分析化学高效液相色谱法.pptVIP

（二）流动相的强度和选择性溶剂的极性（强度）正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强溶剂的选择性不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故选择性不同混合溶剂（二元或多元流动相）第31页，共54页，星期日，2025年，2月5日三、分离条件的选择（一）HPLC中的速率理论涡流扩散A=2λdp球形、小粒度、均匀（RSD＜5%）固定相，匀浆高压填充，以降低A。纵向扩散β=2γDm可以忽略。因为Dl很小，室温操作，且U大于U最佳，第32页，共54页，星期日，2025年，2月5日HPLC中的速率理论传质阻抗固定相传质阻抗CS可以忽略，因df极小流动相传质阻抗Cm要求：dp小，Dm大第33页，共54页，星期日，2025年，2月5日静态流动相传质阻抗 ：由于部分流动相在固定相微孔内的滞留静态流动相传质阻抗系数CsmCsm∝dp2，Csm∝1/Dm，而Dm∝T/η要求:固定相dp2、流动相η都小HPLC中的速率理论第34页，共54页，星期日，2025年，2月5日 H=A+Cmu+Csmu原因：化学键合相，液体流动相结果：HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键合相；②低粘度流动相，流速不宜过快；③柱温适当。HPLC中的速率理论第35页，共54页，星期日，2025年，2月5日（二）正相键合相色谱法的分离条件固定相极性键合相如氰基、氨基键合相等流动相烷烃加适量极性调节剂第36页，共54页，星期日，2025年，2月5日（三）反相键合相色谱法的分离条件固定相非极性键合相如ODS流动相以水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈等极性调节剂弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制剂加入0.1%~1%的醋酸盐、磷酸盐可减少残余硅醇基的作用第37页，共54页，星期日，2025年，2月5日（四）反相离子对色谱法的分离条件固定相 尽可能选择表面覆盖度高且疏水性强的非极性键合相，离子对试剂 离子对试剂所带的电荷应与试样离子的电荷相反流动相pH使试样组分与离子对试剂全部离子化有机溶剂及其浓度同一般HPLC第38页，共54页，星期日，2025年，2月5日仪器分析第十八章高效液相色谱法关于分析化学高效液相色谱法第1页，共54页，星期日，2025年，2月5日经典液相色谱法为基础，引入气相色谱法的理论和实验技术，高压输送流动相，高效固定相及高灵敏度检测器，现代液相色谱分析方法。第2页，共54页，星期日，2025年，2月5日与经典液相色谱法相比

颗粒极细（一般为10?m以下）、规则均匀的固定相，(键合相)传质阻抗小，柱效高，分离效率高；高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度快；高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检测器最小检测限可达10?9g，而荧光检测器最小检测限可达10?12g。第3页，共54页，星期日，2025年，2月5日与气相色谱法相比不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广；可选用各种溶剂作为流动相，对分离的选择性有很大作用，选择性高；一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。第4页，共54页，星期日，2025年，2月5日第一节高效液相色谱法的主要类型和原理一、主要类型 四类基本类型色谱法分配色谱法（partitionchromatography）吸附色谱法（adsorptionchromatography）离子交换色谱法（IEC）空间排阻色谱法（SEC）第5页，共54页，星期日，2025年，2月5日第一节高效液相色谱法的主要类型和原理一、主要类型四类基本类型色谱法分配色谱法（partitionchromatography）吸附色谱法（adsorptionchromatography）离子交换色谱法（IEC）空间排阻色谱法（SEC）化学键合相色谱法第6页，共54页，星期日，2025年，2月5日其他色谱类型亲合色谱法（affinitychromatography；AC）手性色谱法（chiralchromatography；CC）胶束色谱法（micellarchromatography；MC）电色谱法（electrochromatography；EC）第7页，共54页，星期日，2025年，2月5日二、化学键合相色谱法以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法(bondedphasechromatography；BPC)化学键合相：采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相