《分子生物学》8疾病与人类健康-教学课件（非AI生成）.ppt

2、重组型病毒载体在不改变病毒复制和包装所需的顺式作用元件的情况下，有选择性地删除病毒的某些必需基因尤其是前早期或早期基因以控制其表达，所缺失的必需基因的功能由同时导入细胞中的外源基因表达单位提供。一般通过同源重组方法将目的基因插入到病毒基因组中。**3、无病毒基因的病毒载体在辅助系统的作用下，重组载体以特定形式（单链或双链DNA或RNA）被包装到不含有任何病毒基因的病毒颗粒中。这类载体的优点在于载体病毒本身安全性好，容量大。缺点在于往往需要辅助病毒参与载体DNA的包装，造成终产品中辅助病毒污染。**4、基因治疗中的问题基因导入系统基因表达的可控性需要更多的治疗基因1）基因导入系统。基因治疗中的关键问题是必须将治疗基因送入特定的靶细胞，并在该细胞中得到高效表达。这对于恶性肿瘤治疗尤为重要，如果不能有效地将治疗基因导入大多数肿瘤细胞，则至少要求它尽可能不进入或较少进入正常细胞。**2）外源基因表达的可控性。最理想的可控性是模拟人体内基因本身的调控形式，需要全基因或包括上下游的调控区及内含子序列，将对导入基因的载体系统产生严峻的挑战，因为今后设计的载体须有几十kb甚至上百kb的包装能力。**图8-26导入基因的表达诱导框架图**3）治疗基因过少。目前用于临床试验的治疗基因数量很少。绝大部分多基因疾病，如恶性肿瘤、高血压、糖尿病、冠心病、神经退行性疾病的致病基因还有待阐明，因此，可选择的靶基因不多**8.4.3.非病毒载体裸DNA脂质体/DNA复合物（lipolex）多聚物/DNA复合物（polylex）**§8.2裸DNA裸DNA(nakedDNA)未经包装的质粒载体，是结构最简单的非病毒载体。由于在体内易被降解破坏（缺乏保护性外包装）又无靶向性（缺乏可被靶细胞识别的成分），故多采用直接注射或基因枪等物理方法直接导入靶组织或靶器官,如皮肤、骨骼肌、心肌或肿瘤等。利用本法将编码抗原的基因导入皮下，可激发机体产生相应的免疫反应，被称为DNA疫苗（DNAvaccine），是一种较有前途的免疫方法。**显微注射法（microinjection）利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或细胞核**微粒子轰击法利用亚微粒的钨和金能吸附DNA，并将其包裹起来形成微粒，通过物理途径获得高速度，微粒瞬间既可进入靶细胞，达到转移目的基因的目的，而不损伤靶细胞。该方法可使目的基因在皮肤、肝、胰、胃及乳腺等细胞中表达。**§8.3脂质体/DNA复合物脂质体(liposome)是用人工方法将磷脂和相似的两性脂质在水溶液中形成一种脂质双层包围水溶液的微球。常用脂质：胆固醇(能减少通透性并增加磷脂双层的稳定性)，二油酰磷脂酰乙醇酯（DOPE）和二油酰磷脂酰胆碱（DOPC）**应用人工制备的类似细胞膜的膜性结构——脂质体，包装外源基因，再与靶细胞融合，外源DNA导入靶细胞，使其表达。DNA细胞融合转化细胞PEG仙苔病毒DNA脂膜**形成微球时，可将生物大分子如抗体、酶、核酸或小分子药物包入，当其与细胞接触时可通过膜融合或被吞噬等相互作用将包涵物导入细胞，故可作为这些物质的运载工具。**脂质体的脂双层在结构和功能上都与细胞膜相似。主要优点是：①无毒性和免疫原性，不产生免疫排斥；②可生物降解；③可制成0.03~50um直径球体,包裹大小不等的生物分子；④可带有不同表面电荷，与不同表面电荷的细胞膜作用；⑤具有不同的膜脂流动性、稳定性和温度敏感性，适应不同的生理需求。**§8.4多聚物/DNA复合物阳离子多聚体多聚左旋赖氨酸PL(polyL-lysine)+DNA多聚乙烯亚胺PEI（polyethylenimine）多聚物/DNA复合物（polyplex)其氨基基团与DNA的磷酸基团结合，通过电中和使DNA缩合形成稳定的多聚复合物PL/DNA或P