食品安全地方标准蔬菜中三唑磷残留的测定酶联免疫吸附法征求意见稿.docVIP

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FORMTEXT贵州省地方标准

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食品安全地方标准

蔬菜中三唑磷残留的测定酶联免疫吸附法

Determinationoftriazophosresiduesinvegetables—

Enzymelinkedimmunosorbentassay

征求意见稿

XXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

贵州省卫生与计划生育委员会发布

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目次

前言II

1范围1

2规范性引用文件1

3原理1

4试剂和材料1

5仪器2

6试样制备与保存2

7试样测定2

8结果计算3

9检测限、准确度、精密度3

前言

本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由贵州省农业委员会提出。

本标准由贵州省农业委员会归口。

本标准起草单位：贵州省农产品质检中心、北京勤邦生物技术有限公司。

本标准主要起草人：蔡韬、冯才伟、扶胜、李占斌、张莉、陆洋、袁旭、卢平、王震、周雪莉、罗华兰、丁静。

本标准为首次发布。

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食品安全地方标准

蔬菜中三唑磷残留的测定酶联免疫吸附法

范围

本标准规定了蔬菜中三唑磷残留量的酶联免疫吸附测定法。

本标准适用于蔬菜中三唑磷残留量的测定。

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

原理

采用间接竞争酶联免疫吸附（ELISA）方法，在微孔条上包被偶联抗原，试样中残留的三唑磷与酶标板上的偶联抗原竞争三唑磷抗体，加入酶标记的抗体后，显色剂显色，终止液终止反应。用酶标仪在450nm处测定吸光度，吸光值与三唑磷残留量呈负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出三唑磷残留含量。

试剂和材料

4.1三唑磷试剂盒

4.1.196孔板（12条×8孔）包被有三唑磷偶联抗原。

4.1.2三唑磷标准溶液（至少有5个倍比稀释浓度水平，外加1个空白）。

4.1.3三唑磷抗体溶液。

4.1.4过氧化物酶标记物。

4.1.5底物显色溶液A液：过氧化尿素。

4.1.6底物显色溶液B液：四甲基联苯胺。

4.1.7反应终止液：1mol/L硫酸。

4.1.8复溶液（2倍浓缩液）。

4.1.9洗涤液（20倍浓缩液）。

4.2甲醇（分析纯）

4.3水

GB/T6682规定的一级水。

4.4复溶液工作液

用水将2倍的浓缩复溶液按1∶1体积比进行稀释（1份2倍浓缩复溶液＋1份水），用于溶解干燥的残留物及稀释试样，复溶液工作液在4℃可保存一个月。

4.5洗涤液工作液

用水将20倍的浓缩洗涤液按1∶19体积比进行稀释（1份20倍浓缩洗涤液＋19份水），用于酶标板的洗涤，洗涤液工作液在4℃可保存一个月。

仪器

酶标仪

配有450nm滤光片。

匀质器

天平

感量0.01g。

振荡器

离心机

转速≥3000r/min。

氮气吹干装置

涡旋仪

恒温箱

微量移液器

单道20μL～200μL、100μL～1000μL可调，多道250μL。

试样制备与保存

取蔬菜样品，剪碎，10000r/min均质1min。制备好的试样，应即刻进行提取和检测。

试样测定

提取

称取蔬菜试样1.0g±0.05g于50mL聚苯乙烯离心管中，20mL甲醇，置于振荡器上振荡5min，3000r/min以上，20～25℃离心5min，取上层有机相1mL至10mL洁净干燥的玻璃试管中，于50～60℃水浴氮气流下吹干，加入90μL甲醇，涡动10s,再加入910μL复溶工作液，涡动1min，充分混合，取50μL用于分析。

测定

使用前将试剂盒在20～25℃下放置1～2h。

7.2.1将标准和试样（至少按双平行实验计算）所有数量的孔条插入微孔架，记录标准和试样的位置。

7.2.2加50μL系列标准溶液（4