分解纤维素的微生物的分离.pptVIP

关于分解纤维素的微生物的分离第1页，共35页，星期日，2025年，2月5日纤维素，一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。课题背景植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%-60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人类能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。如何分离土壤中分解纤维素的微生物呢？其消化道内，共生有分解纤维素的微生物，能产生纤维素酶而分解纤维素。人没有分解纤维素的能力植食性动物是怎样消化食物中纤维素的？第2页，共35页，星期日，2025年，2月5日㈠纤维素与纤维素酶1.纤维素:多糖(高分子化合物)——基本单位:葡萄糖一、基础知识土壤中某些微生物能够产生纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，然后再利用。许多商品纤维素都是由天然纤维素制得的，如水溶性的羟甲基纤维素钠（CMC-Na）、不溶于水的微晶纤维素（Avicel）等。第3页，共35页，星期日，2025年，2月5日纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX酶(内切酶)和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纤维素2.纤维素酶（1)组成：（2)作用：一种复合酶：C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶第4页，共35页，星期日，2025年，2月5日①取二支20mL的试管。实验：纤维素酶分解纤维素的实验②各加入一张1cm×6cm的滤纸条。③各加入pH4.8，物质的量浓度为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml。甲乙④在乙试管中加入1mL纤维素酶。⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在140r/min的摇床上振荡1h。⑥结果：乙试管的滤纸条消失。讨论：自变量？因变量？无关变量？乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？自变量：纤维素酶的有无自变量的控制：乙试管--1mL纤维素酶溶液甲试管--等量的缓冲液(不能加蒸馏水，会影响溶液的pH)。第5页，共35页，星期日，2025年，2月5日刚果红染色法（二）纤维素分解菌的筛选2、原理：1、方法：即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。刚果红能与纤维素形成红色复合物，而与水解后的纤维二糖和葡萄糖不发生这种反应。红色复合物红色消失，出现透明圈纤维素刚果红（染料）纤维素分解菌纤维素酶四种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈(选择培养基中通过颜色反应直接对微生物进行筛选)第6页，共35页，星期日，2025年，2月5日不同菌落的透明圈大小不同，可以说明微生物产生纤维素酶能力的大小。不同菌落的透明圈大小不同可以说明什么问题？（二）纤维素分解菌的筛选四种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈透明圈的应用：筛选具有某种特定功能（如分泌某种酶）的微生物（目的菌）.第7页，共35页，星期日，2025年，2月5日在长出菌落的培养基上，覆盖质量浓度为1mg/mL的刚果红（简称CR）溶液，10～15min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为1mol/L的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的菌落周围将出现透明圈。先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应。方法1：3、操作：NaCl溶液作用：漂洗作用——洗去与纤维素结合不牢的刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。第8页，共35页，星期日，2025年，2月5日先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应。方法1：3、操作：在倒平板时就加入刚果红。方法2：配制质量浓度为10mg/mL的刚果红（CR）溶液，灭菌后，按照每200mL培养基加入1mL的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。等培养基上长出菌落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。NaCl溶液作用：漂洗作用——洗去与纤维素结合不牢的刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。第9页，共35页，星期日，2025年，2月5日在倒平板时就加入刚果红。先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应。方法1：方法2：3、操作：染色法优点缺点方法1(后置染色法）方法2(前置染色法）颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐。刚果红会使菌落之间发生混杂。操作简便，不存在菌落混杂问题1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈。2.有