DNA的粗提取与鉴定高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

选择性必修三《生物技术与工程》

第3章基因工程

第1节重组DNA技术的基本工具(第二课时DNA的粗提取与鉴定);;

注意：

①不能用哺乳动物的血液作为材料，原因：

成熟的红细胞中无细胞核和线粒体，几乎不含DNA。

②以血液为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g柠檬酸钠(抗凝剂),原因：防止血液凝固。

③利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法：

直接吸水涨破(原因：动物细胞无细胞壁);

P74探究·实践DNA的粗提取与鉴定

3.材料用具(试剂):

①研磨液→保护DNA,破坏膜结构；

②体积分数为95%的酒精→析出DNA;

③2mol/L的NaCl溶液→溶解DNA;

④二苯胺试剂→鉴定DNA;⑤蒸馏水;

称取洋葱，切碎，放入研钵，倒入研磨液,充分研磨。

(1)研磨的目的：

破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中

(2)研磨时间不宜太长：

防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量

(3)有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶

研磨效果好(有利于充分研磨)

(4)研磨不宜太用力;

4.方法步骤：

取材研磨称取洋葱，切碎，放入研钵，倒入研磨液，充分研磨。;

在漏斗中垫上纱布过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取上清液；

或将研磨液倒入塑料离心管中离心，取上清液。

问题1:过滤能用滤纸代替吗?

不可以，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。

问题2:上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质?

可能含有核蛋白、多糖等杂质;

在漏斗中垫上纱布过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取上清液；

或将研磨液倒入塑料离心管中离心，取上清液。

问题3:低温放置几分钟的作用?

①抑制DNA水解酶的活性，进而抑制DNA降解；

②低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂；;

问题1:此步骤的目的是?

使蛋白质等溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。

问题2:酒精预冷的作用?

①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；

②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出；

③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。在上清液中加入体积相等的预冷的酒精溶液，静置

2~3min,溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。;

4.方法步骤：

加入2mol/L氯化钠溶液加入2mol/L氯化钠溶液

不加入丝状物加入丝状物

加入4ml二苯胺试剂加入4ml二苯胺试剂;

P74探究·实践DNA的粗提取与鉴定

5.结果分析与评价：

1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗?用二苯胺试剂鉴定的结果如何?

观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。

二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所

提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。

2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗?

本实验粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。

3.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。

①材料中的核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够。

②加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。

③二苯胺最好现用现配，二苯胺易被空气氧化，颜色改变变成浅蓝色，影响鉴定效果。;

B.图2过程中，用玻璃棒进行交叉搅拌会使DNA析出更快

用玻璃棒搅拌要轻轻搅拌且沿同一方向进行，以免加剧DNA分子的断裂，×;

C.图2析出得到的白色丝状物只能溶于2mol/L的NaCl溶液中

DNA在NaCl溶液中的溶解度是随着NaCl的浓度变化而改变的，×;

D.图3对提取后的DNA进行鉴定，两支试管中均要加入二苯胺试剂;

选项;

步骤;

请据图分析，回答下列问题：

(1)右述图示中，该实验的正确操作顺序是③→②→①④一

(用序号与箭头表示)。

(2)步骤④中使用2mol/LNaCl溶液的目的是溶解DNA;(3)步骤①的目的是析出并获得DNA

其依据的原理是DNA不溶于酒精。

(4)步骤①中所得到的丝状物

为白色，若要鉴定其主要成分为;

(5)由于鸡血较难找到，某学生

试图用猪血代替，结果没有成功，其原因最可能是

猪是哺乳动物，哺乳动物血液;

一、概念检测

1.DNA连接酶是重组DNA技术常用的一种工具酶。下列相关叙述正确的

是(C)

A.能连接DNA分子双链碱基对之间的氢键

B.能将单个脱