调味料中罂粟碱吗啡那可丁可待因和蒂巴因测定.docVIP

《调味料中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因测定》

编制说明

一、任务来源

本标准的制定工作，是按照国家认证认可监督管理委员会下达的任务而进行的，计划编号为2016B259，由宁夏出入境检验检疫局负责起草工作。

二、标准编制的意义

罂粟壳含有20多种生物碱，其中主要成分为吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因。罂粟壳中的生物碱能引起某种程度的惬意和快感，可造成人注意力、思维和记忆功能的衰退，长期使用会引起精神失常，出现幻觉，严重时甚至会导致呼吸停止而死亡。添加了罂粟壳的食物口感独特，有些不法商贩在火锅底料等固体调味料中添加罂粟壳，长期食用无论从身体上还是心理上都会对其产生严重的依赖性。因此，我国《食品安全法》明令禁止在食品中添加罂粟壳等。由于罂粟壳对人体的危害逐渐被人所认识，食品中违法添加罂粟壳及其提取物也逐渐引起人们的关注，因此严厉打击非法添加现象，建立快速、准确的食品中生物碱的测定方法具有重要的意义。

图1罂粟碱五项结构式

目前，固体调味料中非法添加的罂粟壳的检测尚无相关行业标准和国家标准，给食品的监督监管工作带来了一定技术难题，各检测实验室参照各自非标准方法进行样品检测，造成方法的特异性、重复性、检出限不一致，最终导致检出率的差异。文献报道的方法主要有薄层色谱法、化学显色法、电化学法、免疫分析法、GC、GC/MS、LC和LC/MS等仪器方法。调味料基质复杂，罂粟壳物质检测容易受到其他组分的干扰，且目前的检测方法前处理相对较为繁琐，不适合大批样品的快速检测分析，因此，本文针对吗啡、可待因、那可丁、蒂巴因和罂粟碱五种成分，建立了简单快速的前处理分析方法，用液相色谱-串联质谱法进行了定性定量检测，具有准确、灵敏度高等优点。

三、编制依据

本标准的编制遵循GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T20001.4-2015《标准编写规则第4部分：试验方法》和行业标准SN/T?0001-2016《出口食品、化妆品理化测定方法标准编写的基本规定》的要求进行编写制订的。

四、主要实验技术路线

1、定量方法的选择

实验起初以外标法对样品中的罂粟碱五项进行定量分析。结果发现，以火锅底料、拉面汤、固体调味料样品为基质，分别添加40μg/L的罂粟碱、蒂巴因、那可丁，他们的回收率分别在81%-110%,84%-105%，87%-110%之间，而分别添加8μg/L的吗啡、可待因，他们的回收率仅为65%~72%之间，不能满足检测要求。而采用吗啡-D3和可待因-D3作为同位素内标对定量结果进行校正，结果发现经内标法校正，吗啡、可待因的回收率分别可达81%~110%，82%-104%较好地降低了样品基质带来的干扰和影响，提高了定量准确性。因此，本研究针对罂粟碱、那可丁和蒂巴因选择外标法定量，而吗啡和可待因选择内标法定量。

2、提取条件的选择

本标准研究对象为固体调味料，固体调味料一般与食用油混合使用，脂肪、蛋白含量较高，因此选用甲醇、乙酸乙酯、乙腈和0.1mol/L的盐酸-正己烷作为提取液，考察了目标物的响应，结果表明0.1mol/L的盐酸-正己烷提取效果最好，这是因为罂粟生物碱能与酸结合成盐类,易溶于水，所以0.1mol/L的盐酸-正己烷提取效果最好。

3、固相萃取柱的选择

固体调味料中罂粟碱、吗啡、那可丁、蒂巴因、可待因测定的前处理方法有固相萃取法和QuEChERS法。通过试验发现QuEChERS方法部分净化填料进入样液，影响色谱柱寿命。固相萃取法选取C18和MCX柱（1CC30mg）分别经5ml甲醇，5ml水，5ml0.1mol/L的盐酸活化，加入罂粟碱、吗啡、那可丁、蒂巴因和可待因的混合标准溶液，用5ml0.1mol/L盐酸和5ml甲醇：水（3:7）溶液淋洗，吹干，最后用5ml氨化甲醇（5%）洗脱收集，氮气吹干，定容至1ml进样分析，结果显示MCX柱明显优于C18柱。MCX固相萃取柱同时具备反相色谱机理和离子交换机理，所以保留能力和除杂能力比C18柱强，适用于碱性化合物的纯化与富集，操作简单、方便、快速，所以本方法使用MCX柱进行预处理。

4、SPE洗脱液与淋洗液浓度的选择

试验采用Hillic色谱柱进行分离测定，分别收集0.1M盐酸与甲醇：水（7:3）的淋洗液进行质谱分析，结果罂粟碱、吗啡、那可丁、蒂巴因、可待因均未检出。洗脱液采用10%、30%、50%、70%、80%、90%、100%的甲醇水溶液（均加入5%氨水）进行洗脱，分别收集洗脱液进行质谱分析，当洗脱液浓度达90%时即可将五种生物碱全部洗脱，本文选择100%甲醇（加入5%氨水）作为洗脱溶液。

因此，本实验选择0.1M盐酸与甲醇：水（7:3）作为淋洗液，100%甲醇（加入5%氨水）作为洗脱液。

5、定容溶剂的选择

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