《化妆品原料及产品中胶原蛋白含量的测定 圆二色光谱法》（征求意见稿）.pdf

化妆品原料及产品中胶原蛋白含量的测定圆二色光谱法

1范围

本文件规定了使用圆二色光谱法测定化妆品原料及产品中胶原蛋白含量的方法。

本文件适用于以动物皮肤、骨骼等组织为原料，经脱脂、酶法处理和精制等工艺获得的以胶原

蛋白为主要成分的化妆品原料及产品。

注：有三螺旋结构的重组胶原蛋白的检测可以参考本文件。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用

文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）

适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定

GB/T27417合格评定化学分析方法确认和验证指南

YY/TXXX组织工程医疗器械胶原蛋白

JY/T0572圆二色光谱分析方法通则

《中华人民共和国药典》2020版四部

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

胶原蛋白

一类含有至少28种在遗传学上不同类型的分泌蛋白质家族，主要担任机体的结构支撑功能，具



有独特的由三条多肽链（被称为链）组成的三螺旋结构，并具有一定的生物学功能。

3.2

三螺旋结构

构成胶原蛋白的三条多肽链以右手螺旋的形式构成螺旋结构，其中每一条肽链均为左手螺旋构

型。

4原理

利用胶原分子中具有光学活性的基团对平面圆偏振光吸收的差异，可以测定溶液状态下胶原的

构象。由于天然胶原具有三螺旋结构，胶原的圆二色光谱（CD光谱）图在221nm左右的波长处有

正峰，在195nm左右的波长处有负峰，正吸收峰是胶原三螺旋构型的圆二色谱典型特征，可以作

为胶原三螺旋结构有无的定性判定指标。加上负峰位置，说明胶原的三螺旋结构完整性。通过采用

-5-

不同浓度具有完整三螺旋结构的胶原对照，制备系列不同三螺旋结构含量的标准样品，测定其221

nm处的峰高，获得定量标准曲线，用于供试品胶原蛋白相对含量的计算。5材料

5试剂和材料

5.1冰醋酸，色谱纯；

5.2胶原蛋白对照品（建议使用I型胶原蛋白国家有证标准样品）；

5.3比色皿，选择干净、无裂纹、划痕和斑点、透光率高的比色皿；

5.4氮气，按仪器要求选择纯度≤99.99%的氮气进行吹扫。

6仪器和设备

6.1分析天平，十万分之一；

6.2离心机，转速转速10000r/min；

6.3圆二色光谱仪。

7检测方法

7.1待测样品制备

称取5mg胶原蛋白供试品，加入0.5%醋酸溶液，置于10mL容量瓶中，定容至10mL，混合均

匀，配制成浓度为0.5mg/mL胶原溶液，10000r/min离心5min，取上清液备用。

注：液体样品参考终体积浓度为0.5mg/mL胶原溶液制备。

7.2胶原蛋白对照品梯度溶液制备

称取5mg胶原蛋白对照品，加入0.5%醋酸溶液，置于10ml容量瓶中，定容至10ml，摇晃均

匀，配制成浓度为0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL的胶原

梯度溶液。

7.3检测条件

取配制后的胶原蛋白对照品/供试品溶液，加入石英比色皿，置于CD光谱仪上进行检测，使用

0.5%醋酸溶液作为参比。供试品均平行测定三次，取平均值。

检测温度：20℃；

样品池光径：1mm；

扫描范围：180nm～260nm；

扫描波长：0.1nm；

扫描速度：120nm/min。

7.4准确度和精密度要求

线性R值≥0.95；

精密度：用相对标准偏差表示，RSD≤1%。

7.5标准曲线制作

测定胶原蛋白对照品梯度溶液在221nm处的峰高，以峰高为纵坐标，胶原蛋白浓度为横坐标，

绘制标准曲线，计算出回归方程和相关系数（1），用标准工作曲线对样品进行定量。

-6-

(1)

式中：

C——胶原蛋白浓度；

Y——221nm处的峰高；

a——常数；