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??我的研究课题是从发酵液中提取一种小分子抗生素，并得到其纯品。在这个过程中，想用高效液相色谱帮助指导别离，最终开发出用于测定发酵液效价的方法。要到达这个目的，首先要找到一种适宜的分析方法，可以将目标组分与其它杂质分开，并优化到适宜的保存时间和良好的峰型。这其中有一个很大的困难：没有目标组分的纯品，不了解其结构。在这种情况下，如何选着色谱柱？如何配比流动相？这一切都是摆在我这个新手面前的挑战。希望此贴能给像我一样刚开始接触HPLC的战友一些经验。
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??我的目标成分〔发酵液中的活性成分〕是一种小分子抗生素，到目前为止对它有以下了解：
????1.这是一种小分子物质
????2.这种物质极性很强，不溶于绝大多数有机溶剂
????3.这种物质在酸性条件下带正电荷，可能呈碱性??
??在进行高效液相分析之前，发酵液已经经过了预处理，并用大孔树脂、离子交换树脂等在生物显影的指导下进行了初步的别离纯化〔事实上到这可能很多朋友都看出来了，这种物质在发酵液里，说明它溶于水的。可以用离子交换，就是能电离，那么一定极性不低。如果是行家，可能就不会像我傻乎乎的还用C18+甲醇水摸半个月条件了^-^〕。用于上样的样品组成应该不是特别复杂，推测只有一个活性成分，另外活性成分和杂质应该极性都较强。
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??1.某品牌C18柱，5μm，4.6×200mm
??2.极限C18-AQ，5μm，4.6×250mm〔Ultimate柱试用体验〕
??Agilent1100series，在线脱气机，手动进样器VWD检测器
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??我主修的专业和仪器分析相去甚远，也没有接触过HPLC，这次要完成这个任务，起初还是很盲目的。我们实验室有安捷伦1100高效液相色谱仪，配备手动进样器和VWD检测器。第一天站到这台机器面前，简直不知道从哪下手，哪个局部是干什么的也不清楚。于是就找到了当地的安捷伦销售〔很幸运这销售是我校友〕，去图书馆借书，查资料，打安捷伦客服〔这个客服真管用，态度好，讲解细，建议大家多打〕，请学校老师帮助，总算是初步上手了。学会使用色谱仪后，就遇到了第一个问题，选择适宜的色谱柱。
??如何针对我这个样品选色谱柱呢？说实话，当初看到品牌众多，编号各异的色谱柱时都蒙了，让我自己选是不可能了，于是找到了老师和卖色谱柱的工程师。打听了一大圈之后最终得到的建议是用一根C18柱〔现在看这可能也是在蒙，是一种通用的做法，因为大局部的分析都是在C18上完成的〕，于是就买了某品牌C18色谱柱一根，装到色谱仪上，满心欢喜之时，遇到了第二个问题，选择流动相。
??说来惭愧，开始连流动相的概念和有机溶剂〔比方乙腈〕的概念都分不清。也是到处打听，最后买了乙腈和甲醇，选择了最常用的流动相：有机溶剂-水体系。
??这些都有了之后，便开始了尝试。如果要用一个词来总结这些尝试，那就是：失败。有强吸收的地方大多在死体积里。最后甚至用了纯水作为流动相〔洗脱能力最弱〕，依然不能得到很好的效果，愁啊。
下列图是用纯水做流动相得到的色谱图
乍一看图可能还是可以的，但比拟分析之后发现我的目标组分应该是那个2.4分钟左右出峰的。对于一根200mm的柱子来说，这段可能处于死体积的边缘，干扰很多，对以后的定性定量都不利。所以彻底放弃了这种最常规简单的有机溶剂水体系，开始寻求别的方法。
另外想说说很多讲HPLC的书里带的方法开发流程图。因为我刚开始学习HPLC，见到书上的这个流程图时如获至宝，但是仔细一看却心灰意冷。对于一种未知物质，很难用这个图来开发。首先一个分子量大小就得我猜半天，然后是极性还是酸碱，都很难判断。更何况让一个没有经验的人看，这图本身就很难理解。所以我觉得对于新手，又是未知物质，还是先咨询下有经验的人，然后踏踏实实的慢慢开发，在这个过程中就会增长自己对HPLC的理解，找到适宜的方法。〔再想想如果是物质，那可能都有现成的方法，多查查文献就好了〕。总之个人觉得那个图可能对于有经验的人更有意义。
??某日在仪器信息网上闲逛，看到了月旭的这个试用活动，于是填写了申请表，想碰碰运气。结果下午就接到了月旭工程师的。在了解了我的样品情况和已经做过的试验之后，月旭工程师给出了这样的建议：1，用不
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