分子生物学与医学检验课件.ppt

分子生物学-5流式细胞仪Microbead分子生物学-5流式细胞仪Aschematicillustrationofusingfluorescentlymicrobeads分子生物学-5流式细胞仪应用细胞因子的联合检测感染性疾病的联合诊断研究RNA与蛋白质之间的相互作用分子生物学-5临床应用分子生物学-5遗传性疾病的诊断Sickle-cellanemia（镰状细胞性贫血）CysticFibrosis（囊性纤维化）Alpha-1-AntitrypsinDeficiency（α-1-抗胰蛋白酶缺乏症）分子生物学-5Sicklecellanemia-background分子生物学-5分子生物学与医学检验医学检测技术进展分子生物学-5分子诊断学的发展分子诊断学以分子生物学理论为基础，利用分子生物学的技术和方法研究人体内源性或外源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化，为疾病的预防、预测、诊断、治疗和转归提供信息和决策依据。分子生物学-5分子生物学与医学检验历史回顾常规技术边缘技术未来发展分子生物学-5历史回顾分子生物学-5Kan等用液相DNA分子杂交技术成功的进行镰形细胞贫血症的基因诊断——检验诊断进入基因诊断时代分子诊断学的发展分子生物学-5分子诊断学的发展PolymeraseChainReaction(PCR)技术发表1990s人类基因组计划（HGP）启动1999ThejournalofMolecularDiagnostics出版分子生物学-5分子诊断学的发展三大阶段：DNA分子杂交技术——遗传病的基因诊断PCR技术——病原体检测及多基因遗传病组学技术（TheAgeof“Omics”）——高通量密集型检测技术分子生物学-5常规技术分子生物学-5常规技术细胞水平分子水平组学技术DNA免疫印迹ProteinELISAPCR测序流氏细胞仪各类Microarray分子生物学-5常规技术基因结构异常基因表达异常蛋白质m-RNADNA核酸分子杂交PCRDNA测序逆转录PCRReal-timePCRNothern-blotWestern-blot蛋白质组织化学染色ELISA分子生物学-5分子杂交类型分子生物学-5分子杂交技术DNAofvarioussizesElectrophoreseonagarosegelgelDenature-transfertofilterpaperblot分子生物学-5分子杂交技术HybridizetoprobeVisualize分子生物学-5分子杂交技术细胞遗传学产前诊断病原体诊断分子生物学-5PCR分子生物学-5PCR高灵敏度高特异性快速优势分子生物学-5PCR分子生物学-5PCRPCR法检测乙肝的优势表现在：①早期诊断，因为PCR扩增极其敏感，在感染潜伏期即可被PCR法检出。②对低持续感染乙肝病人的诊断，有些乙肝病人体内的病毒长期低复制感染，血清病毒浓度极低，一般酶标试剂无法检出，可以用PCR法检出。③疗效跟踪及病程判断，因为PCR能半定量检测乙肝病毒基因，是病毒是否存在及其数量多少的最直接指标。在治疗过程中通过监测血清或白细胞中病毒基因存在与否及其动态变化即能准确地了解病情。分子生物学-5Western-blot原理:在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测分子生物学-5Western-blot蛋白样品的制备SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳转膜封闭一抗杂交二抗杂交底物显色流程分子生物学-5新兴技术分子生物学-5新兴技术脉冲场凝胶电泳技术流式细胞仪的新应用分子生物学-5脉冲场凝胶电泳（PFGE）原理:

这种电泳是在两个不同方向的电场周期性交替进行的，DNA分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间显著地依赖于分子大小，DNA越大，这种构象改变需要的时间越长，重新定向的时间也越长，于是在每个脉冲时间内可用于新方向泳动的时间越少，因而在凝胶中移动越慢。反之，较小的DNA移动较快，于是不同大小的分子被成功分离。分子生物学-5脉冲场凝胶电泳（PFGE）