DB34_T2242-2014_畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定—高效液相色谱法_安徽省.docxVIP

ICS65.120

B46

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2242—2014

畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定

—高效液相色谱法

Determinnatonofdeoxynivalenolinanimalfoodstuff—Highperformanceliquid

chromatographicmethod

安徽省质量技术监督局

发布

DB34/T2242—2014

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽农业大学提出。

本标准起草单位：安徽农业大学、和县畜牧兽医局、马鞍山市农业委员会。

本标准起草人：王希春、伋兆法、吴金节、陈祥国、夏效平、耿芳芳、许伟、李玉、冯士彬、李贺

侠、张宁。

I

DB34/T2242—2014

畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定-高效液相色谱法

1范围

本标准规定了畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的高效液相色谱法的术语和定义、原理、设备、试剂、

检测步骤。

本标准适用于饲料原料或配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。

本方法的最低检出限为0.8μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

脱氧雪腐镰刀菌烯醇deoxynivalenol，Don

脱氧雪腐镰刀菌烯醇是禾谷镰刀菌（Fusariumgraminearum）等真菌产生的一种次级代谢产物，属

单端孢霉烯族毒素，又称呕吐毒素（vomitoxin，VT）。

4原理

液相色谱系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。原理是根据被测样

品中各组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。被测样品与溶剂混合后在高压泵的作用下通过毛细

管进入色谱柱，样品在色谱柱中作定向迁移运动并和流动相发生互相作用，使多组分的样品逐渐分离为

单个组分，再进入检测，通过对比与分析即可定性定量地鉴定样品中的各个未知组分。

本检测方法原理是毒素经粗提后，流经流动相为乙腈和水的色谱柱时，被分离的组分在流动相和固

定相中溶解度不同而分离。通过具有紫外吸收检测器的液相色谱仪进行检测，根据保留时间定性，外标

法定量。

5设备

1

DB34/T2242—2014

5.2层析柱：内径2cm，长度25cm，砂芯有活塞

5.3粉碎机（DFY-500）

5.4旋转蒸发器（RE-5203）

5.5循环水真空泵（SHZ）

5.6振荡器（HY-5）

5.7离心机（TGL-18R）

5.8恒温水浴锅（HH）

5.9氮吹仪（UGC-12C）

6试剂

6.1本检测方法所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯，水应符合GB/T6682一级用水的规定。

6.2甲醇：HPLC级和分析纯

6.3乙腈：HPLC级和分析纯

6.4乙醇

6.5乙酸乙酯

6.6石油醚

6.7

6.8

硅镁吸附剂

无水硫酸钠

6.9DON标准品：纯度≥99％

6.10

DON标准溶液

——DON标准贮备液：准确称取适量的DON标准品，用乙腈配置成1mg/mL的标准贮备液，避光

储存于4℃冰箱中，用于制备标准曲线。

——DON标准工作液：取DON标准贮备液，用流动相逐级稀释成0.02ng/μL、1ng/μL、5ng/μL、

10ng/μL、15ng/μL、20ng/μL系列标准工作液。

注：凡接触过DON的容器，用双氧水或次氯酸钠浸泡过夜进行脱毒；为了安全，分析人员操作时要佩戴医用乳胶

手套。

饲料原料或配合饲料。

按GB/T14699.1采集有代表性的试样，按GB/T20195进行试样的制备，粉碎，通过0.90mm孔

径分子筛，装入洁净的盛样容器中。

称取试样50.0g（精确到0.1g）置于250mL具塞锥形瓶中，加入100mL乙腈-水（84:16），

振荡30min（重复1～2次），过滤到分液漏斗，加约两倍体积石油醚脱脂，弃上层石油醚，收集下层

乙腈-水层，90℃水浴挥干。加入少量乙酸乙酯溶解，离心，取上清液过柱（乙酸乙酯-甲醇（95:5）洗

2

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柱），90℃水浴减压挥干，1.5mL乙酸乙酯溶解残渣，离心，并转入定容瓶中，吹N2挥干，乙腈定容

至