《植物组织培养》课件 项目3 无菌操作技术.ppt

灭菌和消毒有何差别?为什么?常用的灭菌方法各有哪些优缺点?采用高压蒸汽锅高压灭菌时，应注意哪些事项?实验人员进入接种室接种之前，应做哪些准备工作?1234项目三无菌操作技术任务三外植体的选择与处理任务二无菌操作技术任务一虚拟无菌操作无菌操作任务三外植体的选择与处理知识目标学会处理各种外植体的方法和操作流程；学会外植体的培养方法；掌握外植体的培养过程。123掌握外植体的选择方法；熟练掌握外植体的灭菌方法和无菌操作技术；学会外植体的培养过程123技能目标第一节外植体的选择和处理第二节培养和驯化任务讲解第一节外植体的选择和处理一、外植体选择时应注意：（1）选择优良的种质及母株（2）选择适当的时期（3）选取适宜的大小（4）外植体来源要丰富（5）外植体要易于消毒二、外植体取材的部位：（1）茎尖茎尖不仅生长速度快，繁殖率高，不容易发生变异，而且茎尖培养是获得脱毒苗木的有效途径。因此茎尖是植物组织培养中最常用的外植体。（2）节间部大部分果树和花卉等植物，新梢的节间部是组织培养的较好材料。新梢节间部位不仅消毒容易，而且脱分化和再分化能力较强，因此是常用组织培养材料。（3）叶和叶柄叶片和叶柄取材容易，新出的叶片杂菌较少，实验操作方便，是植物组织培养中常用的材料。尤其是近年在植物的遗传转化中，以叶片为试验材料的报道很多。（4）鳞片水仙、百合、葱、蒜、风信子等鳞茎类植物常以鳞片为材料。（5）其他种子、根、块茎、块根、花粉等也可以作为植物组织培养的材料。三、外植体处理：首先，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、70％酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70％酒精浸10-30s。第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1-2种使用。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次1-3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-10次左右。无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用。第五步接种。接种是将已消毒好的根、茎、叶等离体器官，经切割或剪裁成小段或小块，放人培养基的过程。第二节培养和驯化指把培养材料放在培养室(有光照、温度条件)里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程。项目三无菌操作技术任务三外植体的选择与处理任务二无菌操作技术任务一虚拟无菌操作任务二无菌操作技术知识目标理解有菌和无菌的范畴；掌握常用的灭菌方法；掌握无菌操作过程。123掌握组织培养相关的灭菌方法；熟练掌握无菌操作技术；12灭菌和接种任务讲解灭菌和接种一、灭菌二、无菌操作三、接种第一节灭菌和接种灭菌是组织培养重要的工作之一。初学者首先要清楚有菌和无菌的范畴。有菌的范畴是：凡是暴露在空气中的物体，接触自然水源的物体，至少它的表面都是有菌的。无菌室等未经处理的地方、超净台表面、简单煮沸的培养基、我们使用的刀、剪在未处理之前、我们身体的整个外表及与外界相连的内表，如整个消化道、呼吸道，即我们呼出的气体、培养容器无论洗得多干净等等都是有菌的。灭菌和接种第一节灭菌和接种这里所指的菌，包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其他微生物。茵的特点是：极小，肉眼看不见。无处不在，无时不有，无孔不人。在自然条件下忍耐力强，生活条件要求简单，繁殖力极强，条件适宜时便可大量滋生。灭菌和接种第一节灭菌和接种无菌的范畴是：经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体，经其他物理的或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法必须已经证明是有效的)，高层大气、岩石内部、健康的动、植物的不与外部接触的组织内部，强酸强碱，化学元素灭菌剂等表面和内部等等都是无菌的。灭菌和接种第一节灭菌和接种消毒：杀死、消除或抑制部分微生物，使之不发生作用。灭菌：用物理或化学方法，杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体，即所有生命的物质全部杀死。灭菌和消毒的区别是什么？一、灭菌灭菌和接种灭菌概念1.培养基灭菌◆高压湿热灭菌◆某些激素、维生素采用过滤灭菌视频3-1培养基灭菌自动高压湿热灭菌锅1电源水位指示灯温度、压力显示窗