食品质量安检测技术W43024-基质加标标准工作曲线制备-微教材.docxVIP

农产品与食品质量检测技术教学资源库

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《农产品/食品质量安全检测技术》课程-微教材

微课编号

W4402

微课名称

瘦肉精基质加标标准工作曲线制备

所属模块

兽药残留检测

子模块

M4-4兽用违禁促生长药物的检测——猪肉中瘦肉精（盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺）的检测

关键词

基质加标；瘦肉精；标准工作曲线配制；猪肉

是否通用

√通用农产品食品

是否重点建设

是√否

微课类型

讲授型，实验实训型

微课形式

混合拍摄式

教学设计模式

任务驱动法

教学目标

了解基质效应的定义和产生的原因，了解基质效应去除的方法；掌握基质加标原理和目的，掌握基质加标标准曲线制备方法，通过猪肉中瘦肉精（盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺）的基质加标标准液的配制和标准工作曲线绘制掌握基质加标标准工作曲线制备的操作。

教学内容

知识点

技能点

基质效应的定义

基质效应产生原因

基质效应去除方法

4、基质加标原理

5、基质加标目的

1、混合标准溶液的配制操作

2、基质加标标准工作曲线制备操作

知识讲解

基质效应的概述

基质效应的定义

基质是样品中被分析物以外的组分，基质效应是指在样品测试过程中，由待测物以外的其他物质的存在，直接或间接影响待测物响应的现象。

按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）文件的定义为:

①?标本中除分析物以外的其他成分对分析物测定值的影响；

②?基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。

基质的来源

基质成分包含了生物样品中的内源性成分、样品前处理过程中引入的外源性成分以及生物样品中未知的或性质不确定的成分或体系特性(如粘密度、离子强度、表面张力等)所引起的干扰。

基质效应主要来源于生物样品的内源性组分。内源性组分是指生物样品中存在的有机和无机成分，经前处理后仍存在于提取液中。包括离子颗粒物成分(电解质、盐类)、强极性化合物(酚类、色素)和各种有机化合物(糖类、胺类、尿素、脂类、肽类)及其分析目标物的同类物及其代谢物。其中磷脂是最主要的内源性组分,其对电喷雾电离(ESI)和大气压化学电离(APCI)均会产生离子抑制作用,具有表面活性的甘油磷脂酰胆碱是最强的内源性组分。

外源性组分在生物样品中不存在,但同样会带来基质效应,其由样品前处理过程引入,包括塑料和聚合物的残留、邻苯二甲酸盐、清洁剂(烷基酚)、离子对试剂、有机酸、缓冲液、SPE柱材料。

基质效应产生的原因

图1.基质效应的机理

基质效应的产生原因主要针对使用液相色谱-质谱联用技术分析生物样品中的化合物所产生的基质效应进行讨论。

液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)是将分离性能优异的液相色谱法与灵敏、专属、能提供相对分子质量和结构信息的质谱法相结合的现代分离分析技术,近年来发展迅速,在，生物样品分析中发挥了极大作用，但LC-MS普遍存在基质效应。串联质谱以特异性强著称，但越来越多的数据表明质谱检测同样需要注意避免基质效应，否则，将影响数据的准确性。

液相色谱-质谱分析中的基质效应可追溯到20世纪90年代初，当改变样品基质的种类和浓度时，待测物电喷雾离子化(ESI)质谱的响应值则会降低。一般认为这是由于色谱分离过程中与目标化合物共流出的物质对目标化合物离子化过程的影响。

2001年，美国食品药品管理局(FDA)在《生物分析方法验证准则》中明确要求：在液相色谱-质谱分析方法开发和验证过程中需要对基质效应进行评价。

β-受体激动剂的最常用的检测方法是液-质联用法(LC-MS)，其中高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS／MS)法具有高分离度、高速度和高灵敏度的特点。虽然LC-MS分析中通过目标物母离子与其相应特征子离子的匹配进行检测，而样品共提取基质成分和样品前处理引入的杂质会严重抑制或增强目标分析物在喷雾接口处的离子化，这一现象称为基质效应(matrixeffect，ME)，能够影响检测的选择性和灵敏度，进而影响到分析方法的准确度和精密度。

在生物样品（以血浆为例）中，引起基质效应的主要是磷脂、胆固醇等内源性物质。他们随同待测物从色谱柱上一起被洗脱出来，经离子源气化，进入质谱进行检测分析。而就在液滴气化、发生库伦爆炸变成小液滴直至产生气体离子的过程中，这些内源性的物质由于极性较大，会同待测物离子竞相竞争液滴表面，从而导致待测物的离子化效率降低或增强，引起响应降低或增高，这就产生所谓的基质抑制或基质增强效应。

越来越多的数据表明质谱检测同样需要注意避免基质效应,否则,将影响数据的准确性。MS中，一般认为可能源于待测组分与生物样品中的