SZDB∕Z 315-2018 基于基因条形码的鱼类物种鉴定技术要求.docxVIP

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SZDB/Z

深圳市标准化指导性技术文件SZDB/Z315—2018

基于基因条形码的鱼类物种鉴定技术要求

TechnicalspecificationforidentificationoffishspeciesbasedonDNAbarcoding

2018-08-02发布2018-09-01实施

深圳市市场和质量监督管理委员会发布

I

SZDB/Z315—2018

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语与定义 1

4缩略语 2

5原理 2

6仪器与试剂 2

7取样 3

8实验步骤 3

9结果判断 5

附录A（规范性附录）试剂配制 6

附录B（规范性附录）序列的有效性判定 7

附录C（资料性附录）基因条形码在BOLD系统中物种鉴定流程示意图 9

附录D（资料性附录）基因条形码在NCBI系统中物种鉴定流程示意图 11

II

SZDB/Z315—2018

前言

本文件根据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本文件由深圳市检验检疫科学研究院提出。本文件由中华人民共和国深圳海关归口。

本文件起草单位：深圳市检验检疫科学研究院、深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心、深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心、深圳华大海洋研究院、镇江华大检测有限公司。

本文件主要起草人：郑晓聪、刘荭、石琼、王敏、何俊强、黄玉、阮周曦、于力、王津津、贾鹏、刘莹、温志清、史秀杰、兰文升、秦智锋。

1

SZDB/Z315—2018

基于基因条形码的鱼类物种鉴定技术要求

1范围

本文件规定了鱼类基因条形码鉴定中的样品处理、基因扩增、序列分析、比对鉴定及结果判定等操作程序和规范。

本文件适用于对自然环境种化产生的野生型鱼类或其残存的组织进行物种鉴定,不适用于杂交品种。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

FDASOPforGeneratingDNABarcodesSuitableforSpeciesIdentificationofanUnknownFishTissueSample

3术语与定义

下列术语与定义适合于本文件。3.1

基因条形码（DNAbarcoding）

是指可用于物种鉴定的具有生物物种序列特征的DNA片段，本文件中指鱼类线粒体基因组中的COI基因片段。

3.2

基因条形码鉴定技术（DNAbarcodingidentificationtechnique）

一种利用基因片段进行生物物种鉴定和系统进化关系研究的技术，建立在基因扩增和序列比对的基础之上，它具有不受物种发育状态、雌雄性个体及形态特征完整性与否的限制、减少对分类专家的依赖、不受主观因素影响、准确率高、借助互联网可以实现数据共享等特点。

3.3

空白对照（Blankcontrol）

从基因组DNA提取步骤开始至PCR扩增和PCR产物检测整个过程，没有加入任何鱼源性成分的空白的灭菌洁净离心管，与其他受试的样品平行进行操作以观察实验是否处于正常状态。空白对照没有PCR产物条带产生。

3.4

阳性对照（Positivecontrol）

2

SZDB/Z315—2018

在PCR扩增过程中，与受试样品平行进行的对照反应，以在正常反应情况下一定能产生PCR产物的DNA为反应模板，用于观察整个反应体系和反应过程是否正常，阳性对照应有PCR产物带产生。

3.5

阴性对照（Negativecontrol）

非鱼类样品的其他物种样品，与受试样品平行进行的对照反应，用于观察整个反应体系是否正常，确认没有受到污染，阴性对照没有PCR产物条带产生。

3.6

序列相似度（Similarityofthesequences）反映序列间相似程度的数值，一般以百分数表示。

3.7

FASTA格式(FASTAformat)

生物信息学术语，又称Pearson格式，是一种用文本表示核苷酸序列或者氨基酸序列的格式。核苷酸或者氨基酸碱基用单个字母表示，序列的第一行一般用“＞”起始，随后可以添加序列名或者注释，第二行为序列本身，只允