粉状食品中总肽含量的测定.docxVIP

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CCS

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FORMTEXT43

FORMTEXT湖南省地方标准

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FORMTEXT粉状食品中总肽含量的测定

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FORMTEXT湖南省市场监督管理局??发布

STYLEREF标准文件_文件编号DB43/TXXXX—XXXX

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STYLEREF标准文件_文件编号DB43/TXXXX—XXXX

目次

TOC\o1-1\h前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5试剂和材料 2

6仪器和设备 2

7分析步骤 2

8结果计算及表示 3

9精密度 4

10其他 4

附录A 5

前言

本本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由湖南省市场监督管理局提出。

本文件由湖南省食品标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：湖南英氏营养食品有限公司、中南林业科技大学。

本文件主要起草人:

本文件为首次发布。

粉状食品中总肽含量的测定

范围

本文件规定了粉状食品中总肽含量测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算和表示、精密度、检出限和定量限等内容。

本文件适用于粉状食品中总肽含量的测定。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB6682分析实验室用水规格和试验方法。

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

粉状食品powderedfoods

粉状食品是指含有天然肽的粉末状食品，以及利用动（植）物蛋白质为原料，通过酶解或者微生物发酵法加工后得到分子量小于6,000道尔顿降解肽的粉末状食品。

总肽含量totalcontentofpeptide

粉状食品中肽类物质的总量，以占试样的质量分数来表示。

原理

利用中性磷酸盐缓冲液超声辅助法提取样品中的可溶性蛋白质和多肽，酸沉法去除提取液中的蛋白质，通过双缩脲试剂与酰胺键的显色反应，采用紫外-可见光吸收光谱仪和标准曲线法测定样品中总肽的含量。

酸沉

酸沉是利用调整溶液的pH值使蛋白质的溶解度降低，从而促使蛋白质从溶液中沉淀出来的过程。

双缩脲比色法

在强碱性条件下，酰胺键与硫酸铜生成紫红色络合物，其吸光度与酰胺键的数量成正比，通过紫外-可见光吸收光谱分析法测定540nm波长下的吸光度值，计算总肽的含量。

试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

试剂

三氯乙酸（CCl3COOH）。

氢氧化钠（NaOH）。

硫酸铜（CuSO4·5H2O）。

酒石酸钾钠（NaKC4H4O6·4H2O）。

磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）。

磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。

牛血清白蛋白标准品（BSA）：纯度≥99%。

注：BSA浓度为1.0mg/ml时在280nm波长下的吸光度值为0.66来校正其纯度。

溶液配制

10%氢氧化钠溶液：准确称取50.00g氢氧化钠(5.1.2)，置入500mL容量瓶中，加煮沸后冷却至室温的水溶解，后定容至刻度。

双缩脲试剂：称取1.5g硫酸铜(5.1.3)、6.0g酒石酸钾钠(5.1.4)，置入1,000mL烧杯中，加入500mL水溶解，在玻璃棒搅拌下缓慢加入300mL10%氢氧化钠溶液（5.2.1），转移至1000mL容量瓶中，加水定容至刻度，贮存于聚乙烯瓶中。

三氯乙酸溶液（150g/L）：称取150g三氯乙酸(5.1.1)，置入1,000mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度。

磷酸盐缓冲液（20mmol/L，