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兽药哺乳动物精原细胞染色体畸变试验技术指导原则

一、概述

（一）目的

哺乳动物精原细胞染色体畸变试验是一种通过检测受试物引起动物（通常是啮齿类动物）精原细胞染色体结构畸变的能力以评价受试物对雄性生殖细胞的致突变性的方法。在试验动物通过适当的途径接触受试物一定时间后，用中期分裂相阻断剂（如秋水仙素或秋水仙碱）处理，随后处死、取材，经低渗、固定、软化及染色后制备精原细胞染色体标本，在显微镜下观察中期分裂相细胞，分析精原细胞染色体畸变。

如果有证据表明受试物或其活性代谢产物在睾丸中无法达到足够的暴露量，则不适合使用本方法。本方法不适用于检测染色体数目畸变。

为了确保兽药哺乳动物精原细胞染色体畸变试验结果的真实性、可靠性和可追溯性，根据新兽药研究的规律，结合国内兽药毒理学评价的实际情况制定了本指导原则。对偏离本指导原则的试验研究，申请人应进行解释说明。

（二）适用范围

本指导原则适用于兽用化学药物、兽用中药和兽用天然药物。消毒剂参考使用。

二、基本原则

（一）实验管理

兽药哺乳动物精原细胞染色体畸变试验须执行《兽药非临床研究质量管理规范》或《药物非临床研究质量管理规范》。

（二）具体问题具体分析

兽药哺乳动物精原细胞染色体畸变试验的设计，应在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。应根据受试物的结构特点、理化性质、已有的药理毒理研究信息、适应证和适用靶动物特点、临床用药方案等选择合理的试验方法，设计适宜的试验方案，并综合上述信息对试验结果进行全面分析评价。

三、试验设计

（一）实验动物

1.动物选择

该试验通常采用健康/性成熟雄性小鼠，给药起始年龄建议为8～12周龄。若采用其他雄性哺乳动物，需提供相应的科学依据。应从有实验动物资质证明的饲养单位购买。如果没有资质证明，动物应来源清楚，饲养规范。

试验开始时，动物体重的差异应不超过平均体重的±20%。

2.动物数量

每组每个采样时间点至少包括5只可用于分析的动物。

3.动物管理

实验动物分别进行标记编号和称重，随机分组。

试验前，应进行检疫观察，环境适应期至少为5天。

饲养条件应符合现行国家标准要求。同一处理组的动物应一起笼养（每笼不超过5只）。若动物单只饲养须有充分的科学依据。笼子的安放应随机安排，尽可能减小位置造成的影响。避免阳性对照物和受试物之间交叉污染。

（二）受试物

化学药物：受试物应采用工艺相对稳定、纯度和杂质含量能反映临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。应注明受试物名称、来源、批号、生产日期、含量（或规格）、保存条件、有效期及配制方法等，并提供质量检验报告。试验中所用溶媒和/或辅料应标明名称、标准、批号、有效期、规格和生产单位等，并符合试验要求。

中药、天然药物：受试物应采用能充分代表临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。应采用工艺路线及关键工艺参数确定后的工艺制备，一般应为中试或中试以上规模的样品，否则应有充分的理由。应注明受试物的名称、来源、批号、生产日期、含量（或规格）、保存条件、有效期及配制方法等，并提供质量检验报告。由于中药的特殊性，建议现用现配，否则应提供数据支持配制后受试物的质量稳定性及均匀性。如果由于给药容量或给药方法限制，可采用原料药进行试验。试验中所用溶媒和/或辅料应标明名称、标准、批号、有效期、规格及生产单位。

在药物研发的过程中，若受试物的工艺发生变化可能影响其安全性的，应进行相应的安全性研究。

化学药物试验过程中应进行受试物样品分析，并提供样品分析报告。成分基本清楚的中药、天然药物也应进行受试物样品分析。

（三）试验分组

试验应同时设置受试物组、阳性对照组和阴性对照组（溶剂对照和/或空白对照）。

1.受试物组

至少应设置3个剂量组。

根据相关毒性试验或预试验的结果确定高剂量，最高剂量之下的其他剂量一般剂量间距为约2～3倍，对于具有血液或骨髓毒性的受试物，应在具有严重红细胞系毒性（如具有明显的嗜多染红细胞或网织红细胞抑制）的高剂量之下、间距不超过约2倍。例如，如果受试物具有毒性，最高剂量组原则上为动物出现严重中毒表现和/或个别动物出现死亡的剂量，一般可取1/2LD50，低剂量组应不表现出毒性，分别可取1/4LD50和1/8LD50作为中、低剂量。急性毒性试验给予受试物最大剂量（最大使用浓度和最大灌胃容量）动物无死亡而求不出LD50，单次给药推荐的最高剂量为2000mg/kg/天。

为更充分地研究剂量-反应曲线的形状可能需要增加剂量组。

2.阳性对照组

采用已知的阳性诱变剂替代受试物。推荐的阳性诱变剂包括环磷酰胺（一水合物）、环己胺、丝裂霉素C、单聚丙烯酰胺、亚乙基蜜胺。阳性对照物的剂量水平应预期在体内产生高于本底值的精原细胞或精母细胞染色体结构畸变，且增高程度能达到可检出的水平，又不使阅片者立即发现其为阳