3.1重组DNA技术的基本工具课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

第1节重组DNA技术的基本工具第3章基因工程

普通棉花转基因抗虫棉Bt抗虫蛋白基因(简称Bt基因)问题探讨资料1：棉铃虫是棉花种植区最主要的害虫，主要危害棉株嫩顶和幼蕾，棉蕾受危害后，蛀孔处易受病菌感染，导致腐烂、脱落。1992年，我国南北两大主要产棉区出现了棉铃虫的空前大暴发，北方棉区尤为严重，约30%的棉花种植面积减产，直接经济损失100亿元以上。让作物自带杀虫剂？资料2：科学家发现苏云金芽孢杆菌能通过分泌多种晶体蛋白(简称Bt抗虫蛋白)，破坏鳞翅目昆虫的消化系统进而杀死棉铃虫。思考：假如你是一名科学家，为了挽救棉铃虫导致的棉花减产问题，你接下来会怎么做？

重组DNA技术所需的三种基本工具：这些“分子工具”各具有什么特征？“分子手术刀”“分子缝合针”“分子运输车”准确切割DNA分子将DNA片段连接起来将体外重组好的DNA分子导入受体细胞

问题探讨限制酶如何获取Bt抗虫蛋白基因？需要什么工具？将Bt基因的序列复制粘贴到NEB网页框中，点击提交（Submit）

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问题探讨1001100限制酶切割的作用特点和切割结果是什么？BamHINotIXhoI如何获取Bt抗虫蛋白基因？

一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”1.请同学们阅读资料3~资料5，回答以下问题：任务一：分析限制性内切核酸酶的作用资料3：1970年代，科学家分离出Ⅱ类限制性内切酶（如EcoRI），并证实其仅作用于双链DNA的特定核苷酸序列（如回文序列），切割后产生黏性末端或平末端。通过对比实验发现，这些酶对单链DNA和RNA均无活性。资料4：科学家通过晶体学研究表明，限制酶通过结合双链DNA的磷酸骨架和碱基配对区实现特异性识别，其活性中心无法结合RNA的单链结构或核糖-磷酸骨架。资料5：已知EcoRI只能识别GAATTC序列，并在G与A之间切割磷酸二酯键。（1）根据以上资料分析，限制酶的切割对象是；切割部位是。（2）根据以上资料分析，限制酶切割结果是？小结：限制酶的切割特点是特异性识别双链DNA分子并切割特定部位的磷酸二酯键。形成黏性末端或平末端双链DNA分子磷酸二酯键

一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”任务一：分析限制性内切核酸酶的作用2.【探究活动1】动手模拟限制酶的切割过程：EcoRI(只能识别GAATTC序列，并在G与A之间切割磷酸二酯键)黏性末端平末端SmaI(只能识别CCCGGG序列，并在C与G之间切割磷酸二酯键)

一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”任务一：分析限制性内切核酸酶的作用2.【探究活动1】动手模拟限制酶的切割过程：EcoRI(只能识别GAATTC序列，并在G与A之间切割磷酸二酯键)SmaI(只能识别CCCGGG序列，并在C与G之间切割磷酸二酯键)黏性末端平末端

一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”3.已知各限制酶的识别序列和切割位点(箭头所示)如下，请你根据图示写出相应限制酶切割形成的黏性末端，并思考同种限制酶切割产生的黏性末端是否相同？不同限制酶切割产生的黏性末端是否一定不同？SpeIXbaIBamHI

一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”SpeIXbaI同尾酶：即切割形成相同的黏性末端的限制酶。思考：你从中发现什么规律？同种限制酶产生的黏性末端相同，3.已知各限制酶的识别序列和切割位点(箭头所示)如下，请你根据图示写出相应限制酶切割形成的黏性末端，并思考同种限制酶切割产生的黏性末端是否相同？不同限制酶切割产生的黏性末端是否一定不同？不同的限制酶可能会形成相同的黏性末端BamHI

二、DNA连接酶——“分子缝合针”【探究活动2】以下是不同限制酶切割后形成的DNA片段末端，请你试着把它们缝合起来？此处要用到的分子工具是？这个工具的作用是？任务二：分析DNA连接酶的作用——————磷酸二酯键小结：DNA连接酶可以”缝合”具有相同黏性末端的DNA片段，恢复被切开的磷酸二酯键。

二、DNA连接酶——“分子缝合针”种类种类来源特点DNA连接酶_________E.coliDNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于T4DNA连接酶T4DNA连接酶T4噬菌体E.coli大肠杆菌

二、DNA连接酶——“分子缝合针”与DNA相关的几种酶的比较项目DNA连接酶DNA聚合酶限制酶解旋酶作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键氢键作用对象DNA片段单个的脱氧核苷酸DNADNA作用结果将两个DNA片段连接成重组DNA分子将单个的脱氧核苷酸连接到DNA单链末端切割DNA分子形成黏性末端或平末端将双链DNA分子局部解旋为单链

任务三：分析载体需具