《分子生物学》课件-分子生物第六章.pptxVIP

内容

•1、核酸提取与鉴定

•2、印迹杂交技术

•3、聚合酶链反应

•4、重组DNA技术

•5、转基因技术与基因打靶

核酸提取与鉴定

研究对象：基因组DNA、质粒DNA、总RNA、mRNA等

第一节核酸提取

22%保证核酸一级结构的完整性

40%避免杂质污染

总原则：

核酸提取过程

破碎细胞

lII.破碎细胞或包膜——内容物释放

0

提取1

lIII.核酸分离、纯化

纯化lIV.沉淀或吸附核酸，并去除杂质

I.材料准备

核酸提取的主要步骤：

0

2

一、质粒DNA

l质粒(Plasmid)是游离于细菌

(及个别真核细胞)染色体DNA之

外、能自主复制的遗传物质

l多数是一种闭环DNA，大小为

1-300kb，能够转化细菌，是基

因载体

l提取质粒DNA包括三个基本步骤

1·培养细菌和扩增质粒

01在培养基中加入抑制02如果要扩增的质粒

剂(例如氯霉素)可DNA携带氯霉素抗

以抑制细菌的蛋白质性基因(CmR)，可

合成，从而抑制细胞以用壮观霉素替代氯

分裂，而质粒DNA霉素

会继续复制，拷贝数

可达3000个，这一

过程称为质粒扩增

2·收获和裂解细菌

化学试剂法:十二烷基

机械法:超声波、玻璃珠

12硫酸钠(SDS)等（单

等（易引起DNA断裂）

用难以充分裂解）

溶菌酶-化学试剂联

合法:先用溶菌酶消化，