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*样品准备供试品进入无菌实验室前应作表面消毒，用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒。检验数量：应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4片。一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。第23页，共60页，星期日，2025年，2月5日*样品准备检验量：除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；化学膜剂100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。第24页，共60页，星期日，2025年，2月5日*供试液制备液体供试品、固体、半固体或黏稠液供试品取10ml或10g用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml，混匀，作为1：10的供试液。油剂可加入适量的无菌吐温80使供试品分散均匀;水溶性液体亦可用混合供试品原液作为供试液；非水溶性供试品：乳化或萃取;膜剂供试品：取供试品100cm2，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml浸泡，振摇，作为1：10的供试液;肠溶及结肠溶制剂供试品：取供试品10g，加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液(用于肠溶制剂)PH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml，置45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1：10的供试液;气雾剂、喷雾剂供试品，经处理后同第一项制备供试液;贴剂供试品具抑菌活性的供试品：培养基稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法;第25页，共60页，星期日，2025年，2月5日*细菌、霉菌及酵母菌计数实验方法倾注平皿法薄膜过滤法培养基细菌总数：营养琼脂培养基霉菌及酵母菌计数：玫瑰红钠琼脂培养基、酵母浸出粉胨葡萄琼脂培养基第26页，共60页，星期日，2025年，2月5日*细菌、霉菌及酵母菌计数培养和计数除另有规定外，细菌培养3天，逐日点计菌落数霉菌、酵母菌培养5天，逐日点计菌落数必要时可延长至7天进行菌落计数点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数第27页，共60页，星期日，2025年，2月5日*细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证（1）试验组平皿法：供试液1ml+1ml试验菌菌悬液，平行制备2个平皿，菌落计数；薄膜过滤法：供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入1ml试验菌，过滤，菌落计数；（2）菌液组测定所加的试验菌数；（3）供试品对照组取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数；（4）稀释剂对照组若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。稀释剂+试验菌菌悬液；第28页，共60页，星期日，2025年，2月5日*细菌、霉菌及酵母菌计数验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。结果判断在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌数回收率应均不低于70%；若试验组的菌数回收率均不低于70%，可照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌数回收率低于70%，应采用培养基稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。第29页，共60页，星期日，2025年，2月5日*细菌、霉菌及酵母菌计数1.平皿法采用平皿法进行菌数测定时，应取适宜的连续2~3个稀释级的供试液。取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15~20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。阴性对照试验取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。第30页，共60页，星期日，2025年，2月5日*细菌、霉菌及酵母菌计数营养琼脂-细菌玫瑰红钠琼脂培养基-霉菌第31页，共60页，星期日，2025年，2月5日*细菌、霉菌及酵母菌计数1.平皿法菌数报告规则：细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300、霉菌宜选取平均菌落数小于100的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据；以最高平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、1ml或10cm2供试品中所含的菌数；如果各稀释级的平板均无菌落生长，或仅是最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。第32页，共60页，星期日