高效液相色谱法基本原理.pptVIP

任务5高效液相色谱法

别离原理;理解分析方法中采用的色谱类型

能够正确解释色谱别离过程

能够根据组分性质选择适宜的色谱类型;课程引入;液相色谱是如何完成混合物的别离？;液液分配色谱法

实例：归一化法测定分析纯甲苯试剂的纯度

色谱柱:4.6mm×150mm

固定相:十八烷基硅烷键合相(ODS)

流动相:水:甲醇=15:85

;液液分配色谱法

固定相

将特定的液态物质涂于担体外表

化学键合于担体外表而形成的有机键合层

如C18〔十八烷基硅烷〕、C8〔辛烷基〕、氨基键合硅胶

固定相类型

极性固定相：正相色谱

以极性有机基团如胺基〔-NH2〕、腈基〔-CN〕、醚基〔-O-〕等键合在硅胶外表制成的

非极性固定相：反相色谱

反相色谱法最常用的固定相是C18、C8和苯基键合相的填料，在别离极性很大的化合物时，也可以采用氨基、氰基等极性基团键合固定相。;使用条件

为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值，但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5〔2~8〕。

太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。;反相色谱

常见流动相

流动相洗脱强度顺序：水甲醇乙腈乙醇四氢呋喃丙醇二氯甲烷〔与水不混溶〕

假设采用含一定比例的甲醇或乙腈的水溶液作流动相，可用于别离极性化合物

假设采用水和无机盐的缓冲液为流动相，那么可别离一些易离解的样品，如有机酸、有机碱、酚类等

常见固定相

反相色谱法最常用的固定相是C18、C8和苯基键合相的填料，在别离极性很大的化合物时，也可以采用氨基、氰基等极性基团键合固定相。;疏溶剂理论：

当溶质分子进入极性流动相后,即占据流动相中相应的空间，而排挤一局部溶剂分子；

当溶质分子被流动相推动和固定相接触时，溶质分子的非极性局部或非极性分子〕会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开，直接和非极性固定相上的烷基官能团相结合〔吸附〕形成缔合物，构成单分子吸附层；

当流动相极性减小时，这种疏溶剂斥力下降，会发生解缔，并把溶质分子释放而被洗脱下来;影响溶质保存的三个主要因素：

溶质分子中非极性局部的总外表积

溶质和固定相接触的总外表积愈大，保存值愈大，所以溶质的极性愈弱，疏水性越强，保存值越大。

键合相上的烷基总面积

烷基键合固定相的作用在于提供非极性的作用外表。随着碳链的加长，烷基的疏水特性增强，溶质的保存值也随烷基碳链长度的增加而增大。

流动相的外表张力

流动相的外表张力愈大，介电常数愈大，极性亦愈强；溶质和烷基键合相的缔合作用愈强，流动相的洗脱强度弱，导致溶质的保存值大。;时间，min;正相色谱法;其他类型色谱法

按别离机制分类：

液固吸附色谱法

离子色谱法

凝胶色谱法〔分子排阻色谱法〕

〔空间排阻色谱法〕;氯化噻吩嗪

四种异构体的别离色谱图;液固吸附色谱法

固定相：吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5-10μm

流动相：有机溶剂

适用于别离分子量200-1000的组分，大多数用于

非离子型化合物的别离，常用于别离同分异构体。;吸附

脱附

再吸附

再脱附

…

别离过程是一个吸附

－脱附的平衡过程。;离子交换色谱法

油田水质中的阴离子分析

固定相：薄壳型阴离子交换树脂(3×250mm)

流动相：0.003mol·L-1NaHCO3/0.0024mol·L-1?Na2CO3

;离子交换色谱法

固定相:离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，

在外表未端芳环上接上羧基、磺酸基阳离子交换树脂

在外表未端芳环上接上季胺基阴离子交换树脂

流动相：电解质溶液、有机弱酸或有机弱酸盐溶液;离子交换色谱法

别离原理

树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的

离子进行可逆交换而别离。

应用

离子交换色谱法主要用于分析阴，阳离子，但凡在溶剂中能够电离

的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行别离。

分析物质

有机酸、氨基酸、多肽及核酸。

;凝胶色谱〔分子排阻色谱法〕

油田用驱油剂聚丙烯酰胺损失量的测定？

色谱柱：150mm×46mm

固定相：二醇基键合相，孔径200A，粒径5um

流动相:甲醇/0.05mol/LNaH2PO4;以凝胶(gel)为固定相。它类似于分子筛，但凝胶的孔径比分子筛要大得多。

小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。

常用于别离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。;正确地选