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仪器分析速成攻略色谱部分

从一张色谱分离谱图上，你可以直接读到哪些信息？从而你又可以获得哪些信息？

直接读到：基线、死时间、保留时间（调整保留时间）、峰高、半峰宽（峰底宽）、标准偏差

可分析出：组分数、定量、定性、柱效、柱选择性等等。

2.如何判断色谱柱的柱效？有没有前提条件？

通过理论塔板数或者理论塔板高度来判断柱效：

前提条件：组分的分配系数不同。

色谱图上两峰间的距离大小的本质是什么？峰的宽度的本质又是什么？

根据范式方程说明最佳线速以及最小塔板高度的选择与影响因素。

VanDeemter方程为：，常数A为涡流扩散项系数，B为纵向分子扩散项系数，C为流动相传质阻力和固定相传质阻力相系数之和。由此看出：（1）涡流扩散与流动相线速无关；（2）u较小时，B/u占主导，应选用相对分子质量较大的N2作为载气；（3）u较大时，Cu占主导，应选用相对分子质量较小的H2，He作为载气。

最佳线速：；最小塔板高度：。

由基本分离方程分析各因素对于分离度的影响。

柱效：增加柱长可以提高分离度，但会延长分析时间。所以用减少塔板高度H的方法比柱长好。

分配比：k在1~10范围内，k越大越有利于分离；k大于10时，影响不大。

相对保留值：α越大，越有利于分离。超过1.5后，影响不明显。

6.气相色谱对固定液和担体的基本要求是什么？如何选择固定液？

对固定液的基本要求包括：①选择性要好；②热稳定性要好；③化学稳定

性好；④对试样各组分有适当的溶解能力；⑤黏度低、凝固点低，以便在载体表面能

均匀分布。

对担体的基本要求包括：具有足够大的表面积和良好的孔穴结构，以便使固定

液与试样间有较大的接触面积，且能均匀的分布成一层膜。但担体表面积不宜过

大，否则易造成峰拖尾。此外，还应形状规则、粒度均匀，具有一定的机械强度和浸

润性以及好的热稳定性。

一般按“相似相溶”原则进行选择固定液：①分离非极性物质，一般选用非极性

固定液；②分离极性物质，宜选用极性固定液；③对非极性和极性混合物的分离，一

般选用极性固定液；④分离能形成氢键的试样，选用极性或氢键型固定液；⑤对复

杂难分离的物质，可选用两种或两种以上的混合固定液；⑥样品极性未知时，一般

先用最常用的几种固定液做实验，根据色谱分离的情况，在12种固定液中选择合

适的固定液。（记不住不要记）

7.检测器的性能指标。分别比较气相色谱法和高效液相色谱法的几种检测器。

灵敏度高；检出限低；线性范围宽；稳定性好；死体积小，响应迅速；通用性检测器要求适用范围广；选择性检测器要求选择性好。

气相色谱法：

高效液相色谱法：

紫外吸收

示差折光率

荧光

安培

类型

选择性

通用性

选择性

选择性

线性范围

宽

宽

较窄

宽

最小检测量

小

较大

痕量

微量

能否用于梯度洗脱

能

否

能

否

对流速的敏感性

不敏感

不敏感

不敏感

敏感

对温度的敏感性

低

敏感

低

敏感

8.从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。

解：二者都是根据样品组分与流动相和固定相相互作用力的差别进行分离的。

从仪器构造上看，液相色谱需要增加高压泵以提高流动相的流动速度，克服阻力。同时液相色谱所采用的固定相种类要比气相色谱丰富的多，分离方式也比较多样。气相色谱的检测器主要采用热导检测器、氢焰检测器和火焰光度检测器等。而液相色谱则多使用紫外检测器、荧光检测器及电化学检测器等。但是二者均可与MS等联用。

二者均具分离能力高、灵敏度高、分析速度快，操作方便等优点，但沸点太高的物质或热稳定性差的物质难以用气相色谱进行分析。而只要试样能够制成溶液，既可用于HPLC分析，而不受沸点高、热稳定性差、相对分子量大的限制。

试比较程序升温与梯度洗脱的异同之处。

程序升温是改进气相色谱分离的重要手段。程序升温指在一个分析周期内柱温随时间由低温向高温作线性或非线性变化，以达到用最短时间获得最佳分离的目的。当被测样品复杂，其中的沸点范围过宽时，低温分离虽然效果好但是分离时间过长；高温分离虽然分离时间短但是组分峰往往会出现重叠的现象不利于分析。程序升温可以有效分离高沸程混合样。程序升温要求双柱双气路分离系统，它可以补偿由于固定液流失和载气流量不稳等因素引起的检测器噪声和基线漂移。

梯度洗脱是改进液相色谱分离的重要手段。在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的组成或浓度配比，称为梯度洗脱。在进行多成分的复杂样品的分离时，经常会碰到前面的一些成分分离不完全，而后面的一些成分分离度太大，且出峰很晚和峰型较差。为了使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并达到相互分离，往往要用到梯度洗脱技术。梯度洗脱通过改变：流动相的极性、pH或离子强度来改变分离组分的分离因素，以提高分离效果，增加分辨能力，改善峰形，同时可缩短分离时间。

液