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如何进一步确定分枝杆菌菌种和耐药性？
结核病快速诊断方法在临床诊断中的应用MTB及其耐药性诊断临床样本是否需要分子诊断?是否有强的结核病临床症状?是否有严重的肺部感染?进一步确定和药物敏感检测耐药性分子诊断结核菌阳性?YesYesYes培养阳性？YesNoYesNotTBNo培养(6-8weeks)镜检镜检阳性?No等培养结果No结核菌快速诊断方法
结核分枝杆菌快速诊断方法结核菌核酸扩增诊断试剂盒CobasAmplicorii) AMTDTiii)Loop-mediatedisothermalamplification基因分型方法实验室PCR方法（In-housePCR/qPCR）
只有痰检阳性的病例才能得到满意的结果商业化试剂盒：简便易用但很昂贵实验室PCR诊断方法:相对比较便宜快速主要问题：交叉污染需要严格的实验室设计和操作管理结核菌分子诊断现状评述
126543试剂准备间（ReagentPreparationRoom）样品准备间（SpecimenPreparationRoom）核酸扩增室（AmplificationRoom）产物分析间（ProductAnalysisRoom）工作流程实验人员123456PCR实验室工作平面图
1商业化试剂芯片线条探针检测法2实验室PCR扩增、测序耐药分子诊断方法
HainGenoTypeMTBDRplusMTBIDRpoBkatGinhAHK$300pertest商业化试剂
LineProbeassay
FluoroquinolinesAminoglycosidesethambutolMTBDRslforsecondlinedrugsHK$500pertest
现有诊断试剂的局限性：经过小规模实验检验简单、使用方便昂贵（主要由欧美发达国家研制）我国的需求：简单、便宜、可在基层医院使用重大传染病防治科技重大专项等研究项目：快速诊断试剂研究
菌株，指导临床用药。4提示MDR发生的可能性。5PCR扩增rpoB基因耐药相关的高度保守区（RRDR），测序，检测突变位点。1时间：1周2意义：1）可快速检出约90％利福平耐药3简单可行的方法实验室PCR检测
C4T520611349TCG(TTG)S(L)GCT(GCC)A(A)8233AnalysisofrpoBofRIF-Rstrains6
1261200ACC(ACT)T(T)4811349TCG(TTG)S(L)5311508TTC(TCC）F(S)5843225GCT(GCC)A(A)823CCTT
H37Rv:...ACC…TCG…TTC…….GCTSequencepositionRIF-D(818strain):..ACT…TTG…TCC……GCC01Protein:……………T(T)……S(L)…F(S)…...…A(A)CodonpositioninMtb…400…….450….503………..742CodonpositioninE.coli..481…..531….584……......823inMtb:...1200bp....1349bp...1508bp…3225bp02818
MDR/XDRTB检测程序及所需时间痰显微镜镜检:1dayIf+:DNA扩增1菌型鉴定2耐药基因突变检测32－6daysIf-:培养（液体、罗氏培养基）4阳性（液体：2－3周；罗氏：4－8周）5分子鉴定和耐药基因检测2－6天。同时做常规药物敏感实验作为标准对照6小结：MDR/XDRTB检测
提高痰涂片镜检水平，及时发现高传染性病人对镜检阳性标本进行rpoB基因扩增测序，进行快速药物敏感性诊断细菌学诊断抗原特异性γ-干扰素检测，对潜伏感染及与其他疾病进行鉴别有一定的诊断价值。血清学检测？免疫学诊断结核病诊断
VaccineDevelompment
Koch继1882年发现肺结核的致病菌结核分枝杆菌后，试图从结核杆菌培养介质中得到的结核菌素作为疫苗，由于诱发强烈的迟发型变态反应，没获得成功。1906年Calmette和Guérin发现预先给小牛喂养低毒力剂量的人型结核分枝杆菌对于再次静脉注射致死剂量的人型结核分枝杆菌具有保护作用。结核疫苗研究历史
Calmette和Guérin分离培养牛结核分枝杆菌，经过200-235次传代，终于得到了具有免疫保护力的减毒的牛型结核分枝杆菌株－BacilleCalmette－
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