3.2基因工程的基本操作程序（第3课时）+课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

mRNA;第2节基因工程的基本操作程序

（第3课时）;转Bt基因品系PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果;(2)方法2：DNA分子杂交技术;探针;2检测目的基因是否转录（mRNA）;;通过抗虫、抗病的接种实验鉴定生物是否具有抗性以及抗性的程度等;转基因生物;①检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因;1.目的基因的筛选和获取-前提

利用PCR获取和扩增

人工合成

构建基因文库

2.构建基因表达载体-核心

目的基因、启动子、终止子、标记基因等

3.将目的基因导入受体细胞-关键

农杆菌转化法(植物)、显微注射法(动物)、

感受态细胞（如加Ca2+）转化法(微生物);

4.目的基因的检测与鉴定-保证

分子检测：是否插入、转录、翻译

个体水平：是否具有抗性以及抗性强度等。;(1)PCR利用了原理，通过调节来控制DNA双链的解聚与结合，PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器。

(2)PCR扩增DNA片段还利用了

的原理。一次PCR一般要经历次循环。;①PCR仪

②微量离心管;10倍浓缩的扩增缓冲液（含Mg2+）;(1)加样：

用微量移液器按照PCR反应体系配方，在微量离心管中依次加入各组分。;(3)反应：参照右表的参数，设置好PCR仪的循环程序。将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中进行反应。;问题1：PCR的产物是什么？;（1）电泳：DNA分子具有_______________，在一定的_______下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷________的电极移动，这个过程就是电泳。;（2)鉴定方法：①PCR的产物一般通过来鉴定。;③DNA染色:凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长300nm的紫外灯下被检测出来;标准参照物（Marker）;琼脂糖凝胶电泳装置;制备凝胶;制备凝胶;制备凝胶;一条条带（目的基因片段）;4.如果电泳鉴定的结果没有条带或不止一条条带，请分析产生这个结果的可能原因？

;注意：

1.为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行处理。

2.该实验所需材料可以直接从公司购买，缓冲液和酶应分装成小份，并在储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上。

3.在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须。

4.在进行操作时，一定要戴好。

5.PCR扩增不能随意加大试剂用量。;1.研究人员将一种海鱼的抗冻蛋白基因afp整合到土壤农杆菌的Ti质粒上，然后用它侵染番茄细胞，获得了抗冻的番茄品种。判断下列相关表述是否正确。

（1）afp基因是培育抗冻番茄用到的目的基因。（）

（2）构建含有afp基因的Ti质粒需要限制酶、DNA连接酶和核酸酶（）

（3）只要检测出番茄细胞中含有afp基因，就代表抗冻番茄培育成功（）;2.利用PCR既可以快速扩增特定基因，也可以检测基因的表达。下列有关PCR的叙述错误的是（）

A.PCR用的DNA聚合酶是一种耐高温酶

B.变性过程中双链DNA的解开不需要解旋酶

C.复性过程中引物与模板链的结合遵循碱基互补配对原则

D.延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP和4种核糖核苷酸;二、拓展应用

1.研究人员在研究转基因烟草中外源卡那霉素抗性基因的遗传稳定性时，发现44株转基因烟草中有4株该基因的遗传不符合孟德尔遗传规律，在它们的自交后代中出现了较多的没有卡那霉素抗性的植株。请查找相关资料，尝试对这个问题作出解释。;2.八氢番茄红素合酶（其基因用psy表示）和胡萝卜素脱饱和酶（其基因用crtl表示）参与β-胡萝卜素的合成。pmi为磷酸甘露醇异构酶基因，它编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长。科学家将psy和crtl基因转入水稻，使水稻胚乳中富含β-胡萝卜素，由此生产出的大米称为“黄金大米”。请根据以上信息回答下列问题。;（2）在构建质粒载体时，目的基因序列中能否含有用到的限制酶的识别序列？为什么？;（3）请查找相关资料，了解科学家为什么要培育“黄金大米”以及当前关于“是否要推广黄金大米’”的各种争论。你还可以提出自己的看法，并与同学交流讨论。