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实验五色谱实验

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知识基础：

色谱分析是基于分析样品各组分在并的两相中的或在固定相上的不同等，而使各组分分离。

常用的色谱分析方法有：①纸色谱法；②薄层色谱法；③柱色谱法；④高效液相色谱法；⑤气相色谱法。其中高效液相色谱法和气相色谱法是常用的分析化学实验手段。

色谱法在有机化学中的应用主要有以下几方面：、分离混合物、检测化学反应是否完成、。

第一部分纸色谱分离氨基酸

一、实验目的

1.了解纸色谱分离的原理。2.掌握纸色谱分离的操作方法。

二、实验原理

纸色谱属于分配色谱的一种，通常使用一种特制的滤纸为惰性载体，以吸附在滤纸上的水或其他溶剂作固定相，而含有一定比例水的有机溶剂作流动相（称为展开剂）进行展开分离。由于分析样品内各组分在两相中的分配系数不同而达到分离的目的。适用于多官能团或极性较强的有机物的分离和鉴定，如糖类和氨基酸的分析。

三、实验内容

1.实验准备取少量甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、混合氨基酸试样，配制成浓度约为1%的氨基酸溶液。滤纸大小根据实验需要选择，用铅笔在滤纸上轻轻的划出起点线，并标出点样位置。注意手持纸条的两端，避免手上物质干扰氨基酸分离，手持处待放入展开剂之前必须剪掉。起点线距离展开时的滤纸下端，样品点位置位于起点线上三分点上。

2.点样以点样毛细管吸取少量试样溶液，在滤纸上按照已标记好的编号分别点样（可以选择1个纯品氨基酸和1个混合氨基酸），控制点样直径在0.2～0.5cm，然后将其晾干或用热风吹干。

3.展开向纸色谱展开槽中注入展开剂（正丁醇：醋酸：水=4：1：1）20mL，将已晾干的、点好样的滤纸点有试样的一端向下悬挂在展开槽中，滤纸下端应位于展开剂液面以上。盖上盖子，先饱和一段时间，然后将下端放入展开剂液面下约1.5cm处，但试样斑点处必须在之上。

4.计算比移植当溶剂前沿接近滤纸上端终点线时，取出滤纸，迅速划出溶剂上沿，然后晾干。用喉头喷雾器喷洒0.2%茚三酮乙醇溶液（氨基酸可以与茚三酮发生显色反应），待显色完成后用铅笔在滤纸上划出斑点位置、形状及大小，计算Rf值。

四、实验记录

实验记录

物质类别

Rf值

甘氨酸

酪氨酸

苯丙氨酸

混合氨基酸

第二部分薄层色谱分离圆珠笔芯色素

一、实验目的

1.了解薄层色谱分离的原理。2.了解薄层板的制备。

3.掌握薄层色谱分离的操作方法。

二、实验原理

薄层色谱法简称TLC法，是一种微量快速的分离分析方法，属于固-液色谱，方法是将吸附剂或载体涂布在玻璃板或薄膜上，然后将样品点在薄板上，再以展开剂展开。实验室中常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、聚酰胺等。分离时间短，灵敏度较高。

三、实验内容

1.铺板称取一定量硅胶G放入研钵，按照硅胶与0.5%CMC-Na溶液的质量体积为1∶3的比例加入黏合剂，搅拌除去气泡，调成糊状物，然后均匀地涂布在玻璃板上。

2.活化将涂好的薄层板在室温下水平放置晾干，再移入烘箱内，升温至105～110℃，并维持此温度30min后，置干燥器中保存备用。

3.点样取薄层板，在其一端离边沿约1cm处用软铅笔轻轻画一点样线。用点样毛细管吸取少量样品溶液，轻轻接触薄层板点样处，如一次点样量不够，可待溶剂挥发后，再点，反复数次，但应控制样品的扩散直径不超过2mm。两个样品点之间距离应大于1.5cm。

4.展开将配好的展开剂（正丁醇:乙醇:水=9∶3:1）倒入层析缸，液层厚度约0.5cm，将薄层板向下放入缸内，盖好缸盖，静置。待展开剂前沿上升至距顶端约1cm时，取出薄层板，用铅笔标出前沿位置，晾干或吹干。

5.计算分离结果中，按Rf值大小应依次得到天蓝色(碱性艳蓝)、紫色(碱性紫)和翠蓝色(铜酞菁)三个斑点。

四、实验记录

实验记录

物质类别

Rf值

天蓝色(碱性艳蓝)

紫色(碱性紫)

翠蓝色(铜酞菁)

（请登录雨课堂于下次实验课前提交本次实验思考题作业。）