核酸的生物合成 (8).pptVIP

（四）原核细胞DNA的半不连续复制过程前导链（leadingstrand）：当复制叉沿DNA向前移动时，由于两条模板链是反向平行的，而DNA聚合酶只能以5‘→3’的方向合成新链，同时新链必须与模板链反向平行，碱基配对。这样，以走向3‘→5’的亲代链为模板，子代链就能连续合成，称为前导链；滞后链（laggingstrand）：以走向5‘→3’的亲代链为模板，在其上DNA也是以5‘→3’方向合成，因此和复制叉移动的方向正好相反，所以随着复制叉的移动，形成许多不连续的片段，最后连成一条完整的DNA链，该链称为滞后链。第31页，共72页，星期日，2025年，2月5日复制叉的移动方向解旋酶DNA聚合酶III解链酶RNA引物引发体DNA聚合酶ISSB3′3′5′前导链随后链3′5′复制的起始DNA链的延长DNA链终止5′RNA引物3′3′半不连续复制过程第32页，共72页，星期日，2025年，2月5日复制体：在DNA合成的生长点（既复制叉上）分布着许多与复制有关的酶和辅助因子，它们在DNA的模板链形成离散的复合物，彼此配合进行高度精确的复制，称为复制体。复制体沿着复制叉方向前进就合成DNA。第33页，共72页，星期日，2025年，2月5日聚合酶III核心酶大肠杆菌复制体结构示意图聚合酶I聚合酶III核心酶滞后链前导链解螺旋酶引物合成酶RNA引物引发体拓扑异构酶II?-夹子?-聚体?-夹子?-复合物RNA引物单链结合蛋白（SSB）第34页，共72页，星期日，2025年，2月5日E.coli基因结构及复制起始点第35页，共72页，星期日，2025年，2月5日大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列GATCTNTTNTTT成串排列的三个13bp序列共有序列共有序列TTATCCACADnaA蛋白结合位点四个9bp序列DnaADnaB（解螺旋酶）SSB大肠杆菌DNA复制起点在起始阶段的结构模型第36页，共72页，星期日，2025年，2月5日1.复制的起始起始：当DNA的双螺旋解开后，合成RNA引物的过程。

引发体：引物合成酶与各种蛋白质因子构成的复合体，负责RNA引物的合成。引发体沿着模板链5’→3’方向移动（与冈崎片段合成的方向正好相反，而与复制叉移动的方向相同），移到一定位置上即可引发RNA引物的合成。（1）DNA解旋、解链、形成复制叉；（2）RNA引物合成。第37页，共72页，星期日，2025年，2月5日在复制开始时，先用低放射性的3H－脱氧胸苷标记大肠杆菌。经数分钟后，再转移到含有高放射性的3H－脱氧胸苷培养基中继续进行标记。第38页，共72页，星期日，2025年，2月5日电镜下的T7DNA（线形）复制1.一旦母链解链，子链就开始合成(nocompleteunwindingofchains);2.复制通常是从内部特定位点开始(notfromtheends,notrandom);3.复制进程沿着两个方向进行(determinedbymeasuringthedistancebetweenthereplicationforkandtheends)ReplicationoriginReplicationforks第39页，共72页，星期日，2025年，2月5日Denaturedloops(single-stranded)NondenaturedDNA(double-stranded)变性图谱Thedenaturedloopsarereproducibleandthuscanbeusedaspointsofreference(DNAreplicationstartsatspecificorigins).第40页，共72页，星期日，2025年，2月5日OnlyoneRNAprimerisneededforsynthesizingtheleadingstrand.(DnaB)第41页，共72页，星期日，2025年，2月5日*****大肠杆菌复制叉上的蛋白质第42页，共72页，星期日，2025年，2月5日RNAprimersarerepeatedlyformedbytheprimaseonthelaggingstrand.第43页，共72页，星期日，2025年，2月5日2.复制的延伸（1）子链延长