高中生物学浙科版选择性必修3：第一节 细胞培养是动物细胞工程的基础-教学课件.pptx

细胞培养是动物细胞工程的基础

1讨论概括动物细胞培养的营养和环境条件及体外生长特点，认同物质与能量观、稳态与平衡观等生命观念3小组探讨培养条件、评估不同方法和器材、评价实验方案、分析处理结果，体验科学探究的基本思路和方法学习目标2观察分析体外动物细胞生长特点，构建动物细胞培养的流程模型，发展比较、归纳、概括、建模的科学思维4以间充质干细胞移植治疗肝病为真实情境，认识干细胞移植的广泛应用，关注日常健康生活，培养社会责任

肝病自测：有没有疑似症状？

如何体外培养间充质干细胞用于移植治疗？间充质干细胞移植

任务一：明确动物细胞培养的条件【小组讨论】联系干细胞生活的内环境，确定体外培养所需的营养条件和环境条件营养物质血浆、组织液和淋巴通过动态的有机联系，共同构成机体内细胞生活的直接环境。血清中有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子等活性物质。可以参考微生物培养基成分联系平时饮食，应该有水、无机盐、氨基酸、糖类我们平时吃的蔬菜水果中含有丰富的维生素应该也是细胞所需要的人体细胞还得生活在37°C左右、有稳定的温度湿度和酸碱度的环境，还需要O2

任务一：明确动物细胞培养的条件【小组讨论】联系干细胞生活的内环境，确定体外培养所需的营养条件和环境条件基本营养：水、无机盐、氨基酸、糖类、维生素环境条件：温度、湿度、pH、气体36.5±0.5°C7.2-7.4O2和CO2营养物质血浆、组织液和淋巴通过动态的有机联系，共同构成机体内细胞生活的直接环境。血清中有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子等活性物质。+血清①过滤除菌②加抗生素如何提高培养成功率？

任务二：探索动物细胞培养的流程【活动一】小组合作，构建模型阅读书本P65，小组合作初步设计基本实验思路。无菌取材接种培养解离处理

1.为什么要先解离分散细胞？①成块组织中细胞靠在一起，生长增殖受限②细胞分散利于细胞与培养液充分接触，保证细胞所需O2与营养物质的供应和代谢废物的排出【活动二】交流讨论，详化方案无菌取材接种培养解离处理

机体各种组织器官都由细胞和细胞外基质组成。细胞外基质通过介导细胞黏着等方式决定细胞形状、参与细胞迁移，其主要成分有胶原纤维、纤连蛋白、层连蛋白等多种蛋白和一些多糖类物质，其中胶原纤维占较大比重。血管透明质酸胶原纤维成纤维细胞纤连蛋白方法2：蛋白酶处理2.如何将组织块解离分散？【阅读资料，探讨解离方法】方法1：机械处理

选用胃蛋白酶还是胰蛋白酶？胰蛋白酶。因为动物细胞培养适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶(1.5～2.0)失活，而胰蛋白酶(7.2～8.4)活性高。2.如何将组织块解离分散？方法1：机械处理方法2：蛋白酶处理对比两种方法，确定本小组的处理方案（胰蛋白酶/胶原蛋白酶）无菌取材接种培养解离处理【活动二】交流讨论，详化方案

注意酶解的浓度和时间！→加培养液终止解离2.如何将组织块解离分散？方法1：机械处理方法2：蛋白酶处理优点缺点机械法操作简便，可直接进行培养分散效果差酶解法分散效果好最好先机械处理；会破坏膜蛋白，损伤细胞（胰蛋白酶/胶原蛋白酶）无菌取材接种培养解离处理【活动二】交流讨论，详化方案

恒温培养箱：可调温度、湿度CO2培养箱：可调温度、CO2、湿度3.请选出最适合动物细胞培养的培养箱，并说明原因。通过空气只能满足细胞呼吸，但是细胞呼吸产生CO2，会导致pH下降，pH不稳定×95%空气满足细胞呼吸5%CO2维持pH稳定【活动二】交流讨论，详化方案无菌取材接种培养解离处理

CO2培养箱制成细胞悬液机械终止解离离心分离细胞接入培养液酶解卡氏瓶取动物组织机械/酶解处理分散CO2培养箱培养

任务二：探索动物细胞培养的流程

任务二：探索动物细胞培养的流程实验开始培养期间【活动三】观察概括动物细胞的体外生长特点

大部分动物细胞必须与其他细胞发生联系才能生存，否则就会凋亡。细胞先分泌细胞外基质，基质黏附在培养瓶、培养皿的底部，然后细胞再通过其表面表达的黏附因子与这些细胞外基质结合，完成贴壁过程。体外细胞生长特点一：贴壁生长【活动三】观察概括动物细胞的体外生长特点

？体外细胞生长特点二：接触抑制圆球形细胞刚开始铺展贴壁生长（100×）动物细胞贴壁生长,数量增加（100×）细胞贴壁生长铺满瓶壁后,数量不再变化（100×）【活动四】演绎推理，画出培养皿中培养结果解除方法分瓶培养

【活动五】观看视频，完善模型

原代培养CO2培养箱培养处理，分瓶制成细胞悬液CO2培养箱培养酶解传代培养动物细胞培养概念：从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。原理：细胞增殖（有丝分裂）细胞系：可传代的细胞接触抑制取动物组织机械/酶