DB5132T 88-2023 牦牛肉PCR一膜芯片技术检验方法　.docxVIP

ICS07.080A04

DB5132

四川省（阿坝藏族羌族自治州）地方标准

DB5132/T88—2023

牦牛肉PCR—膜芯片技术检验方法

IdentificationofYakMeatwithPCR-membraneChipTechnology

2023-10-26发布

2023-12-25实施

阿坝藏族羌族自治州市场监督管理局发布

I

DB5132/T88—2023

目次

前言 II

引言 III

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义、缩略语 1

3.1术语和定义 1

3.2缩略语 1

4原理 2

5设备与材料 2

6主要试剂 2

7实验用水 2

8检验步骤 2

8.1PCR引物及探针 2

8.2样品处理与DNA提取 3

8.3多重PCR反应体系 4

8.4膜芯片制备 4

8.5杂交显色 4

8.6结果判读 5

9结果表述 5

10生物安全及检测过程中防止交叉污染的措施 5

参考文献 7

II

DB5132/T88—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由阿坝藏族羌族自治州农业农村局提出并归口。

本文件起草单位：四川省龙日种畜场、西南民族大学、成都产品质量检验研究院有限责任公司、成都鸿宜瑞信息技术咨询有限公司。

本文件主要起草人：何明珠、江明锋、史贇学、赵睿骁、蒲华荣。

III

DB5132/T88—2023

引言

本文件的发布机构提请注意,声明符合本文件时，可能涉及到专利号为ZL201910400450.2《一种牦牛肉鉴定试剂盒》相关的专利的使用。

本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。

该专利持有人已向本文件的发布机构承诺。他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下，就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联系方式获得:

专利持有人姓名:江明锋(西南民族大学),文勇立(西南民族大学),王誉(西南民族大学)。

请注意：除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

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DB5132/T88—2023

牦牛肉PCR-膜芯片技术检验方法

1范围

本文件规定了牦牛肉动物源性成分的PCR-膜芯片技术检测方法。

本文件适用于水牛、黄牛、猪、羊、鸡、兔、鸭、狗、牦牛肉及其制品的动物源性成分检测，检出限为1%。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测GB/T34796水溶液中核酸的浓度和纯度检测

3术语和定义、缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1.1聚合酶链式反应polymerasechainreaction；PCR

在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。

3.1.2多重聚合酶链式反应multiplexPCR

在同一PCR反应体系中加入两对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应。

3.1.3膜芯片技术membraneChipTechnology

将预先制备的DNA探针有序的固定于尼龙膜表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，得出样品的遗传信息（基因序列及表达的信息）。

3.2缩略语

PCR：polymerasechainreaction；聚合酶链式反应DNA：DeoxyriboNucleicAcid；脱氧核糖核苷酸

SSC：SalineSodiumCitratebuffer；杂交印记缓冲液PCRMasterBuffer：PCR缓冲液

dNTP：deoxy-ribonucleosidetriphosphate；脱氧核糖核苷三磷酸TaqPolymerase：The