羊可食性组织中地昔尼尔残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.docxVIP

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羊可食性组织中地昔尼尔残留量的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了羊可食性组织中地昔尼尔残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。

本文件适用于羊的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中地昔尼尔残留量的检测，其他畜禽产品的检测可以参照执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中残留的地昔尼尔用乙酸乙酯溶液提取，正己烷除脂，HLB柱净化，液相色谱-串联质谱测定，基质匹配标准曲线校正，外标法定量。

5试剂和材料

5.1试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。

5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。

5.1.4乙酸乙酯（C4H8O2）。

5.1.5正己烷（C6H14）。

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5.1.6无水硫酸钠（Na2SO4）。

5.2溶液配制

5.2.120%甲醇溶液：取200mL甲醇，用水稀释至1000mL，混匀。

5.2.20.1%甲酸溶液：取1mL甲酸，用水稀释至1000mL，混匀。

5.3标准品

地昔尼尔（Dicyclanil，C8H10N6，CAS：112636-83-6），含量≥99.9%。

5.4标准溶液的制备

5.4.1标准储备液：取地昔尼尔标准品10mg，精密称定，加乙腈适量使溶解并稀释定容至100mL容量瓶，配制成浓度为100μg/mL的标准储备液。-18℃以下避光保存，有效期6个月。

5.4.2标准工作液：精密量取标准储备液0.1mL于100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为1μg/mL的标准工作液。-18℃以下避光保存，有效期3个月。

5.4.3标准系列工作液：精密量取标准工作液适量，用20%甲醇水溶液稀释，配制浓度为5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL的标准系列工作液。

5.5材料

5.5.1亲水亲脂固相萃取柱：6mL/500mg，或性能相当者。

5.5.2微孔尼龙滤膜：0.22μm。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

6.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。

6.3高速离心机：转速可达10000r/min。

6.4涡旋振荡器。

6.5固相萃取装置。

6.6氮吹仪。

7试样的制备与保存

7.1试样的制备

取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。

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——取匀浆后的供试样品，作为供试试样。

——取匀浆后的空白样品，作为空白试样。

——取匀浆后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样。

7.2试样的保存

-18℃以下保存。

8测定步骤

8.1提取

称取试料（2±0.02）g，于50mL离心管中，加无水硫酸钠2g，加乙酸乙酯溶液10mL，漩涡振荡10min，10000r/min离心5min，上清液转入另一50mL离心管中。10mL乙酸乙酯重复提取一次，合并两次上清液，于50℃氮气吹干。用20%甲醇水10mL溶解残余物，加正己烷10mL除脂，涡旋振荡5min，10000r/min离心5min，弃去上层正己烷，下层溶液备用。

8.2净化

固相萃取柱依次用甲醇5mL和水5mL活化。取全部备用液过柱，用20%甲醇水5mL淋洗，抽干，甲醇5mL洗脱，收集全部洗脱液，于50℃氮气吹干，用20%甲醇水2.0mL溶解残余物，过微孔尼龙滤膜后上机测定。

8.3基质匹配标准曲线的制备

精密量取标准系列工作液各取1.0mL，分别加于经提取、净化步骤处理的空白试样中，溶解残余物，过微孔尼龙滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定。以地昔尼尔定量离子质量色谱峰面积为纵坐标，基质匹配标准溶液