经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介.pptVIP

实验四、双缩脲法测定蛋白质的浓度;相关知识;方法;一、实验目的;;双缩脲反响:碱性环境;蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反响。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，因此被广泛地应用。

在一定的实验条件下,未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反响,并于540－560nm下比色,可通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。

除－CONH－有此反响外，－CONH2，－CH2－NH2，－CS－NH2等亦有此反响。;三、实验仪器、材料和试剂;四、实验操作步骤;〔二〕?绘制标准曲线

以每管蛋白的含量为横坐标,其相对应的A520为纵坐标绘制标准曲线。

〔三〕未知样品蛋白质浓度的测定

取2只试管，每只分别参加1ml稀释的未知样品，再分别参加4ml双缩脲试剂，操作方法同前。

然后，测540nm处光密度值，取其平均值。从绘制的标准曲线查得未知样品的蛋白浓度。;五、实验结果