1乙型肝炎表面抗原-ELISA操作注意事项 2.肥达氏反应.ppt

一、肥达氏反应检测操作规程第一排O(1:40)H(1:40)甲(1:40)乙(1:40)丙(1:40)第二排O(1:80)H(1:80)甲(1:80)乙(1:80)丙(1:80)第三排O(1:160)H(1:160)甲(1:160)乙(1:160)丙(1:160)第四排O(1:320)H(1:320)甲(1:320)乙(1:320)丙(1:320)第五排O(1:640)H(1:640)甲(1:640)乙(1:640)丙(1:640)第六排O(1:1280)H(1:1280)甲(1:1280乙(1:1280丙(1:1280第七排O(1:2560)H(1:2560)甲(1:2560乙(1:2560丙(1:2560第八排O(对照)H(对照)甲(对照)乙(对照)丙(对照)操作程序：每个标本需要8*5方式摆好试管如上图作倍比稀释：方法：取一支大试管，加入4.9ml生理盐水，125ul被检血清配成1:40的样品稀释液，每次从中取出500ul加入到第一排的各试管中。再向大试管中加入2.5ml生理盐水，混匀后每次取出500ul加入到第二排的各试管中，重复上述操作直到第七排试管。再向各试管中加入25ul混匀菌液。同时作阴性对照，每项做一个。方法：25ul混匀菌液加到500ul生理盐水。混匀试管后放入37℃水浴箱中过夜。第二日观察结果，阳性对照良好的前提下，出现明显凝集现象的最大稀释倍数为结果。临床应用：机体感染伤寒杆菌一周，可出现抗菌体“O”抗原抗体和抗鞭毛“H”抗原抗体。可作为伤寒和副伤寒感染的辅助诊断。参考值:O凝集价:80;H凝集价:160才有诊断意义。如急性期，恢复期双份血清效价4倍以上增长更有意义。但近期接种过伤寒、副伤寒疫苗者，其凝集价亦可升高。注意事项：1．标本要新鲜。2．严格按照说明书操作。相关文件或参考文献：1．全国临床检验操作规程；2．临床免疫学检验技术?二、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测规程ELISA操作及注意事项标本种类及采集：采集前病人准备：受检者应空腹标本种类：血清或血浆标本要求：采集病人静脉血，室温放置不超过4小时，分离血清备用。标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。实验原理

在微孔条上预包被纯化的乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清中（或血浆）乙肝表面抗原（HBsAg）。使用仪器：加样器酶标仪

试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒试剂生产厂家：上海科华生物有限公司。试剂盒组成：HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。试剂储存条件及有效期：

2-8℃避光保存，有效期9个月。

容器及试剂添加剂：真空采血管促凝剂加分离胶操作步骤：1.平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。2.配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。3.编号：将微孔条固定于支架，按序编号。4.加样：待检样品和质控品50微升加入反应孔内，同时加阴性对照2孔，阳性对照1孔每孔50微升，设空白孔1孔。5.加酶：各孔分别加入酶结合物1滴（空白孔除外），充分混匀后置37℃水浴箱孵育30分钟。操作步骤：6.洗板：取出反应板，用洗板机洗板5次，用吸水纸拍干。7.显色：各孔加底物液A液，B液各1滴，混匀，置37℃水浴箱孵育15分钟。8.比色：每孔加入终止液1滴，混匀。用酶标仪读数：取波长450nm，参考波长630nm，先用空孔校零，然后读取各孔OD值。9.结果判断与分析样品OD值/阴性对照平均OD值≥2.1判断为阳性，否则为阴性。注：阴性对照小于0.05按0.05计算，大于等于0.05按实际OD值计算。乙型肝炎病毒（HBV）属于DNA病毒。HBsAg存在于HBV外壳部分的糖蛋白，是诊断乙型病毒性肝炎诊断标准之一。目前检测下限为0.2ng/ml临床意义如下：1、是乙型肝炎病毒感染的早期指标，大多数病例出现于感染后1～2个月，ALT升高前2～8周出现于血清中，8～9周其滴度达高峰。定量检测其含量在5ng～0.2μg/ml之间，少数可达2000μg/ml以上。以后随病情好转，逐渐降低或消失，有部分病例可维持数年、数十年甚