原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
编号：1-6
：双向凝胶电泳
概述：
双向凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术（根据蛋白质等电点进行分离）以及SDS
－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（根据蛋白质的大小进行分离）。这两项技术结合形
成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳。
目的：
凝胶中蛋白的检测、图像和分析、蛋白鉴定、分离蛋白质组所有蛋白。
原理：
1、根据蛋白质的等电点（第一向）和分子量（第二向）的不同进行分离。
蛋白质是两性分子，在不同的pH环境中可以带正电荷、负电荷或不带电荷。
对每个蛋白质来说都有一个特定的pH，此时蛋白质的静电荷为零，此pH值即
该蛋白质的等电点(pI)。将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，它会
向与其所带电荷相反的电极方向移动。在移动过程中，蛋白分子可能获得或失去
质子，并且随着移动的进行，该蛋白所带的电荷数和迁移速度下降。当蛋白质迁
移至其等电点pH位置时，其净电荷数为零，在电场中不再移动。聚焦是一个与
pH相关的平衡过程：蛋白质以不同的速率靠近并最终停留在它们各自的pI值；
在等电聚焦过程中，蛋白质可以从各个方向移动到它的恒定位点。
双向电泳的第二向是将IPG胶条中经过第一向分离的蛋白转移到第二向
SDS．PAGE凝胶上，根据蛋白相对分子质量或分子量(MW)大小与第一相垂直
的分离。蛋白质与十二烷基硫酸钠(SDS)结合形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物，
由于SDS是一种强阴离子去垢剂，所带的负电荷远远超过蛋白质分子原有的电
荷量，能消除不同分子之间原有的电荷差异，从而使得凝胶中电泳迁移率不再受
蛋白质原有电荷的影响，而主要取决于蛋白质分子的质量大小，其迁移率与分子
量的对数呈线性关系。
步骤：
１.样品
２.第一向分离等电聚焦
３.第二向分离聚丙烯酰胺凝胶电泳
３.修饰和加工，如用32P标记可以研究磷酸化蛋白的变化
流程图：
文档评论（0）