动物细胞培养的准备.pptxVIP

第三章

细胞培养的准备工作

玻璃器皿金属器械橡胶塑料制品

玻璃器皿的清洗浸泡（自来水）→刷洗（洗衣粉）→酸泡（24小时）→自来水冲洗→蒸溜水浸泡和冲洗→50℃烘干01橡胶、塑料制品的清洗清水清洗→浸于自来水过夜→用纱布或棉签和50℃稀洗液刷洗→流水冲洗（15－20遍）→晾干→浸于清洁液15分钟→流水冲洗（15－20遍）→蒸馏水浸洗三次，三蒸水泡24小时→晾干或50℃烘干备用。02

正压除菌滤器的清洗含稀洗涤剂的水中，反复刷洗后→流水冲洗15min→漓水→蒸馏水浸泡24h→三蒸水浸泡24h→晾干或50℃烘干备用。02金属器械的清洗放到含洗涤剂的水中反复刷洗后→自来水反复冲洗干净→晾干→用75％酒精擦拭→自来水反复冲洗干净→最后三蒸水浸洗3次，晾干或50℃烘干备用。01

塑料器材常用的塑料器材有多孔培养板（4孔、6孔、12孔、24孔、96孔）、培养皿、培养瓶及吸头。重复使用的处理步骤：自来水刷洗3％HCl或2％NaOH溶液浸泡过夜自来水充分冲洗双蒸水冲洗3次紫外线直接照射或辐照灭菌

清洗时应注意：浸泡、煮沸、酸泡的器皿内要充满液体，不得有气泡。冲洗时要流水振荡冲洗，方法是：每瓶灌2/3容积的自来水，振荡后倒掉，重复15-20次。煮沸前水面要高于器材5厘米，水沸后投入洗涤剂

组成强度重铬酸钾（克）浓硫酸（毫升）蒸馏水（毫升）弱液1001001000次强液1202001000强液631000200

01包装材料：牛皮纸02硫酸纸03铝箔04纱布05金属消毒桶06铝质饭盒07方式：全包装08局部包装

包装时应注意：手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材的使用端；封闭器材使用端，标记器材手持端；小包装；玻璃管道口（尖吸管、移液管手持端等）加棉花。

清除或杀灭物品上的一切微生物,以杀灭芽孢为准

物理法1：紫外线消毒紫外线直接照射消毒是各实验室常用的方法；紫外线消毒时产生臭氧，对身体有害，故紫外线消毒停止后30分钟才可入室工作。目前有的实验室采用电子灭菌灯代替紫外灯进行空气消毒。主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒。

紫外线消毒法是利用紫外线照射，使菌体蛋白发生光解、变性，菌体内的核酸、酶遭到破坏而死亡的一种消毒方法。紫外线的杀菌力与其波长密切相关，最佳杀菌波长为250-270nm.

光照消毒法主要利用紫外线照射，使菌体蛋白发生光解变性而导致细菌死亡，常用方法有：日光曝晒消毒法日光曝晒法用于枕头、床褥、床垫、棉絮等的消毒，一般曝晒6h可达到消毒，曝晒时2h翻面一次紫外线消毒法紫外线消毒法用于空气消毒与物品表面的消毒

物理法2：干热消毒焚烧灭菌法;燃烧灭菌法;干烤消毒灭菌法:用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品，如油剂、粉剂、玻璃器具、金属制品等;干热是指相对湿度在20%以下的高热，由空气导热，传热较慢，干热消毒灭菌常用的方法;01微波消毒灭菌法:①用于食品及餐具的消毒医疗药品及耐热非金属材料物品的消毒灭菌玻璃器皿，160oC90-240mins02

目前细胞培养工作中采用的培养用液，包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用滤过消毒以除去细菌。

滤膜薄且光滑，容易移动，安装时膜位置一定要放正。过分干燥的滤膜很脆，在高压或高温干燥时易破裂，因此安装前可先用三蒸水润湿滤膜。01为保证过滤效果，在使用时，每次垫两张滤膜，上面一张孔径为0．45微米，下面一张孔径为0．22微米，或两张均为0．22微米。02使用无齿玻片镊子夹取滤膜，以防止镊齿弄破滤膜。03加大压力时用力应均匀，用后打开滤器对光检查滤膜是否移动和有无破裂。04滤膜使用时应注意：

用于滤过除菌的各式滤器滤过除菌法：培养基、血清、消化酶、抗生素等。

物理法4：湿热灭菌湿热由空气和水蒸气导热，传热快，穿透力强，湿热消毒灭菌常用的方法：煮沸消毒法高压蒸汽灭菌法，一般高压蒸汽灭菌的压力为102.97-137.30kPa，温度为121～1260C．经15-30min可达到灭菌目的最常用、最有效的方法；布、金属、橡胶、玻璃、某些培养液培养液，橡胶：10磅（115oC）20mins；玻璃、金属：12磅（121oC）30mins；

高压蒸汽灭菌器

化学消毒灭菌法是利用化学药物渗透细菌体内，使菌体蛋白凝固变性，干扰细菌酶的活性，抑制细菌代谢和生长或损害细菌膜的结构，改变其渗透性，破坏其生理机能等，从而达到消毒灭菌目的

化学消毒剂的使用原则根据物品的性能及微生物的特性，选择合适的消毒剂。01严格掌握消毒剂的有效浓度、消毒时间及使用方法。