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2.2动物细胞融合与单克隆抗体
英枕网出
中
新冠病毒全人源单克隆抗体获批进入临床试验
央视网快看
微生物研究所
40
本节聚焦
1、什么是动物细胞核移植技术?
2、动物体细胞核移植的基本过程是什么?
3、体细胞核移植技术的应用前景有哪些?
4、怎样理性看待体细胞核移植技术存在的问题?
温故而知新
杂种植物
植物细胞融合
植物体细胞杂交
融合的
原生质(AB)融合,
②
植物组织培养
杂种细胞(AB)
再分化
⑤
再生新壁③
植物
细胞A
植物细胞B
原生
质体B
原生质体A
脱分化
移栽
去壁
去壁
思考有没有技术让不同种动物的体细胞杂交,培育出集不同细胞优势于一身的动物细胞呢?
植物体细胞杂交技术跨越不同种植物之间生殖隔离的屏障,
克服远缘杂交不亲和的障碍,培育出新的作物类型。
人鼠杂交细胞
细
胞
融
合
灭活的仙台病毒
诱导
实例:1970年,动物细胞融合实验
人细胞
细胞融合
37°
培养40min
绿色荧光
染料标记
的膜蛋白
鼠细胞
红色荧光染料标记的膜蛋白
如果让动物细胞进行融合,与植物有哪些不同之处?
◆无需去除细胞壁
◆全能性受限制,不能培育成新的动物个体
一、动物细胞融合技术
一、动物细胞融合
1.概念:动物细胞融合也称细胞杂交,是指_两个或多个动物细胞结合
形成一个细胞_的过程。
2.原理:细胞膜的流动性动物细胞融合特
3.诱导细胞融合的三种方法有的诱导方法
(1)物理法:如离心、电融合法等。
(2)化学法:如_聚乙二醇(PEG)(3)生物法:如_灭活病毒诱导法
4.过程:
细胞膜融合细胞质融合细胞核融合融合完成的标志
5.结果:融合后的杂交细胞具有原来两个或_多个细胞_的遗传物质。
一、动物细胞融合技术
(二)问题:
1、什么是病毒的灭活?
灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力,但是并不破坏
病毒的抗原结构。
2、灭活病毒诱导细胞融合的原理
病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使
细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。
丧失感染活性(不感染细胞)
保留融合活性(能诱导细胞融合)
紫外线
灭活
仙台病毒
①研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
②利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术,为制造单克隆抗体开辟了新途径。
突破有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能种间、属间、科间,
甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得成功。
一、动物细胞融合技术
》》一、动物细胞融合技术
思考:19世纪30年代,科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人
的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象?
病人体内病毒等能诱导多个
体细胞融合形成了多核细胞。
肺结核病人病理切片
》》一、动物细胞融合技术
(三)灭活病毒诱导细胞融合过程:
在病毒的作用下细胞膜打开
灭活的病毒颗粒粘附于细胞表面
细胞核融合
形成杂交瘤细胞
病毒颗粒
细胞膜融合
不能无限增殖产生大量抗体
缺点:制备的抗体一般为多克隆抗体,产量低、纯度低,特异性差
》》一、动物细胞融合技术
(八)传统抗体制备方法及缺陷
增殖分化浆细胞多种抗体
抗原
抗原不纯
傅統抗血清
所有抗體混合
筛选单一B细胞
动物体内
刺激
抗原
免疫
g
二、单克隆抗体技术及其应用
1、科学家发现:1)体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上
2)每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体
如何获得大量、单一的抗体?
2、需解决问题:一个B淋巴细胞细胞群抗体
单克隆抗体
3、遗憾:体外培养时,一个B淋巴细胞不能无限增殖
如何解决这一难题?
克隆
1:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的
癌细胞
2:有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和无限增殖能力同时具备
动物细胞融合
》》二、单克隆抗体及其应用
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
骨髓瘤细胞(癌细胞)能无限增殖
杂交瘤细胞
动物细胞融合
杂交细胞
》》二、单克隆抗体及其应用
一个极富创造力的方案:
既能迅速大量增殖,
又能产生专一抗体
1975年,米尔斯坦和柯勒
1984年,诺贝尔生理学或医学奖
动物细胞培养
单克隆抗体
》》二、单克隆抗体及其应用
2、单克隆抗体的制备过程
用抗原注射小鼠
骨髓瘤细胞
诱导融合
已免疫B
淋巴细胞
小鼠的脾脏中获取
从患骨髓瘤的小鼠体内取
骨髓瘤细胞的培养
多种杂交细胞
多种杂交
瘤细胞
2
杂交瘤细胞
》》二、单克隆抗体及其应用
融合的细胞
第一次筛选置于选择性
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