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兔卵母细胞收集

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CONTENTS

01

实验准备流程

02

卵母细胞采集方法

03

体外操作要点

04

质量控制标准

05

应用领域说明

06

注意事项与规范

01

实验准备流程

实验动物选择标准

选择繁殖能力强、遗传背景清晰、卵母细胞数量和质量高的动物种类。

种类

选择处于生育期的雌性动物，年龄适中，避免过老或过幼。

年龄

确保实验动物身体健康，无传染病和生殖系统疾病。

健康状况

器械与试剂准备清单

耗材

棉签、纱布、无菌手套、吸头等。

03

生理盐水、麻醉剂、消毒剂、卵母细胞收集液、培养液等。

02

试剂

器械

手术刀、手术剪、手术镊、吸管、离心管、培养皿、显微操作器等。

01

操作环境预处理要求

洁净度

操作环境需保持高度洁净，避免微生物和尘埃的污染。

01

温度

保持适宜的温度，有利于卵母细胞的存活和操作。

02

湿度

适宜的湿度有助于维持卵母细胞的正常生理功能。

03

光照

避免强光刺激，以免影响卵母细胞的质量。

04

02

卵母细胞采集方法

麻醉与固定操作规范

根据实验需求和动物种类选择合适的麻醉剂，确保麻醉效果稳定且对动物伤害小。

麻醉剂种类选择

麻醉深度掌控

固定方法

严格控制麻醉深度，避免因麻醉过深或过浅导致实验误差或动物死亡。

选择适当的固定方法，如使用固定架或手术台，确保动物在实验过程中保持稳定。

卵巢组织采集步骤

卵巢位置确定

通过解剖图谱或实验经验，准确确定卵巢位置，避免误伤其他器官。

卵巢剥离

使用手术器械仔细剥离卵巢周围的结缔组织，确保卵巢完整无损。

卵巢清洗

使用生理盐水或专用清洗液清洗卵巢，去除表面附着的血液和杂质。

卵巢保存

将采集的卵巢放入适宜的保存液中，以保持其生物活性。

卵母细胞分离技术

卵泡破裂法

通过机械或化学方法破裂卵泡，使卵母细胞释放出来。

酶解法

细胞培养法

利用酶的作用分解卵巢组织，从而释放出卵母细胞。这种方法对细胞损伤较小，但需要严格控制酶的种类和浓度。

将卵巢组织切成小块，放在特定的培养液中培养，使卵母细胞自然释放出来。这种方法操作简便，但培养周期较长。

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03

体外操作要点

选择适合兔卵母细胞生长的基础培养液，如MEM、α-MEM等。

添加必要的营养成分，如胎球蛋白、生长因子、维生素等，以支持卵母细胞的生长和发育。

根据卵母细胞发育阶段和需要，添加适量的激素，如促性腺激素、孕酮等，以促进卵母细胞的成熟和发育。

保持培养液的渗透压和pH值在适宜范围内，以确保卵母细胞的正常生长和发育。

培养液配置参数

基础培养液

营养成分

激素添加

渗透压和pH值

卵母细胞成熟培养条件

培养温度

卵母细胞需要在适宜的温度下进行培养，一般保持在37℃左右。

01

气体环境

卵母细胞培养需要一定的气体环境，如5%的CO2和95%的空气，以维持培养液的酸碱平衡和细胞呼吸。

02

湿度

保持适宜的湿度，以防止培养液蒸发和卵母细胞表面干燥。

03

避光培养

卵母细胞在黑暗环境中生长和发育较好，因此需要在避光条件下进行培养。

04

显微操作技术规范

无菌操作

轻柔操作

适时更换培养液

精确操作

显微操作需要在无菌条件下进行，避免微生物污染。

卵母细胞比较脆弱，操作时需要轻柔，避免对卵母细胞造成机械损伤。

卵母细胞在培养过程中会产生代谢产物和废物，需要定期更换培养液，以保持培养环境的清洁和营养物质的充足。

显微操作需要精确、细致，如卵母细胞的捡取、移动、培养等操作都需要准确无误。

04

质量控制标准

细胞形态学评估

卵母细胞应形态均匀，无明显变形或萎缩。

形态均匀

卵母细胞质应均一、清晰，无颗粒或空泡。

细胞质

卵母细胞应有适当的大小，以便于后续操作。

卵母细胞大小

成熟度判定指标

卵母细胞第一极体

卵母细胞第一极体应正常形成并排放。

03

卵母细胞应无极体或极体数量正常。

02

卵母细胞极体

核成熟度

卵母细胞核应处于适当的成熟度，如生发泡（GV）期。

01

细胞活性检测方法

活性染料检测

采用活性染料，如台盼蓝，检测卵母细胞活性。

01

细胞膜完整性

采用荧光染料检测卵母细胞膜的完整性。

02

代谢活性检测

通过检测卵母细胞代谢活性，如细胞内ATP含量，来评估其活性。

03

05

应用领域说明

生殖生理学研究

卵母细胞形成过程

研究卵母细胞从原始卵泡到成熟卵泡的整个过程，有助于了解生殖生理的基本机制。

卵母细胞质量评估

卵母细胞与生殖激素关系

通过对卵母细胞的形态、功能及遗传特性等方面的评估，为生殖生理学研究提供基础数据。

探讨卵母细胞在生殖激素作用下的发育和调控机制，为生殖生理学研究提供新思路。

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3

体外受精技术应用

利用特定方法和技术，从雌性动物卵巢中采集卵母细胞，为体外受精提供优质的卵子来源。

卵母细胞采集

卵母细胞培养

体外受精过程

在人工培养条件