第十二章高效液相色谱法95课件.pptx

第十二章高效液相色谱法

概述第一节

（1）高压：压力可达15～30Mpa。（2）高速：流速为0.1～10.0ml/min。（3）高效：可达每米5000塔板以上。在一根柱中同时分离的成分可达100种。（4）高灵敏度：紫外检测器的灵敏度可达0.01ng，同时消耗样品少，具有分离、分析的双重作用。1.高效液相色谱法（HPLC）的特点第一节概述高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography,HPLC）是在经典液相柱色谱法的基础上引入了气相色谱的理论和技术，采用高压泵、高效固定相以及高灵敏度检测器发展而成的分离分析方法。

2.经典液相色谱法与高效液相色谱法的比较高效液相色谱法经典液相色谱法柱长：10～25cm10～200cm口径：2～10mm10～50mm粒度：5～50μm（2500～300目）75～600μm（200～30目）柱压力：2～20MPa0.001～0.1MPa柱效：104～105/m2～50/m进样量：10-7～10-2g1～10g分析时间：3分钟～1小时1～20小时第一节概述

3.高效液相色谱法与气相色谱法的比较高效液相色谱法与气相色谱法一样，都属于色谱法，具有：选择性高、分离效率高、灵敏度高、分析速度快等特点。受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析，高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此，不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大的有机物，原则上，都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。第一节概述

高效液相色谱法的优点：(1)应用范围广；（2）流动相选择性高；（3）室温条件下操作高效液相色谱法的局限性：（1）在高效液相色谱仪中，使用多种溶剂作为流动相，当进行分析时所需成本高于气相色谱仪，且易引起环境污染。此外进行梯度洗脱操作时，它比气相色谱仪的程序升温操作复杂。（2）高效液相色谱仪中缺少如气相色谱仪中使用的通用型检测器(如热导检测器和氢火焰离子化检测器)。近年来蒸发激光散射检测器的应用日益增多，有望发展成为高效液相色谱仪的一种通用型检测器。（3）高效液相色谱仪不能替代气相色谱仪，去完成要求柱效高达10万块理论塔板数以上，必需用毛细管气相色谱仪分析组成复杂的具有多种沸程的石油产品。（4）高效液相色谱仪也不能代替中、低压柱色谱法，在200kPa至1MPa柱压下去分析受压易分解、变性的具有生物活性的生化样品。第一节概述

高效液相色谱法的主要类型及原理第二节

（1）吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、排阻色谱法（2）化学键合相色谱法(主要）。（3）离子抑制色谱法。（4）离子对色谱法。（5）离子色谱法。（6）亲和色谱法。1.主要类型第二节高效液相色谱法的主要类型及原理

（1）化学键合相是采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相。（2）以化学键合相为固定相的色谱法简称键合相色谱法（3）化学键合相的优点固定相的均一性和稳定性好，使用过程中不易流失，使用周期长。柱效高，重现性好。能使用的流动相和键合相的种类多，分离的选择性高。（4）根据化学键合相与流动相极性的相对强弱分类：分为正相（normalphase，NP）和反相（reversedphase，RP）键合相色谱法。2.化学键合相色谱法第二节高效液相色谱法的主要类型及原理

正相键合相色谱法正相键合相色谱法（固定相的极性大于流动相的极性）采用极性键合相为固定相，如氰基（－CN）、氨基（－NH2）或二羟基键合硅胶。流动相：非极性或弱极性溶剂加极性调节剂如烷烃加醇类（正己烷-甲醇）。适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物。分离机制：将有机键合层看作一层液膜，溶质在两相间溶解。极性强的组分k大，保留时间（tR）长,后洗脱出柱。第二节高效液相色谱法的主要类型及原理

反相键合相色谱法反相键合相色谱法（固定相的极性小于流动相的极性）固定相：非极性键合相如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）键合硅胶。流