临床免疫学检验(五年制医学检验专业适用).docVIP

绪论

Δ根底免疫学理论

相关内容：抗原、抗体、补体、细胞因子、HLA、免疫系统、免疫应答

Δ临床免疫学

抗感染免疫、超敏反响、自身免疫、肿瘤免疫、移植免疫

Δ免疫学实验技术

免疫学检验

抗原抗体反响

Δ抗原抗体反响：高度特异性

体内：体液免疫效应

体外：血清学反响(沉淀反响、凝集反响、补体参与的溶血反响、补体结合试验、中和试验、免疫标记技术)

Δ原理

内因：Ag、Ab能特异性结合

外因：Ag、Ab结合的动力

静电引力〔库仑引力〕

范德华力〔电子云力〕小于静电引力

氢键大于范德华力

疏水作用力〔作用最大〕

Δ盐析：在高浓度电解质〔如NaCl〕存在的条件下，NaCl可先与Ab分子结合〔在Ab未与Ag相遇时〕，排斥H2O分子，从而使Ab蛋白质优先沉降

Δ特点：

特异性：

交叉反响〔cross-reaction〕：抗体对具有相同或相似抗原表位的不同抗原的反响。

先决条件：存在共同Ag表位

意义：①免疫学诊断：外斐氏反响——用变形杆菌OX19、OX2、OXk做抗原查血清抗体，诊断斑疹伤寒〔立克次氏体感染所致〕

②免疫病理损害〔Eg：链球菌感染后易导致肾小球肾炎，原因是链球菌与人体肾小球基底膜有共同Ag表位所致〕

最适比例

Ab过剩，前带〔可溶性抗原抗体复合物〕

Ag过剩，后带〔可溶性抗原抗体复合物〕

Ab、Ag适宜比例沉淀物等价带〔沉淀物〕

Δ抗体〔等价带范围不同〕

R型抗体家兔免疫血清较宽大多数小动物

H型抗体马免疫血清较窄人和多数大动物

可逆性：

Ag+Ab?AgAb

原因：非共价键结合，不是化学反响

Δ影响因素

自身因素：①Ag：理化性质、抗原表位数目及种类

②Ab：来源〔R型orH型〕、特异性、亲和性、浓度

外界环境条件：①电解质：0.9%NaCl，if浓度过高，会盐析

②pH：6~8，if小于3，酸凝集；过高，碱变性

③温度：37℃

沉淀反响及免疫电泳

Δ颗粒型抗原凝集反响eg：细菌、RBC

Δ可溶性抗原沉淀反响eg：血清蛋白溶液、多糖抗原

Δ沉淀反响〔precipitationreaction〕：可溶性抗原与相应抗体结合，在电解质存在，两者比例恰当时，可出现肉眼可见的沉淀现象

Ag：沉淀原Ab沉淀素

实验中为使抗原抗体比例〔数量〕恰当，应稀释Ag

Δ分类

液相沉淀：絮状沉淀、环状沉淀、免疫比浊测定

凝胶扩散：双扩、单扩

凝胶免疫电泳：免疫电泳、对流免疫、火箭免疫

Δ絮状沉淀试验

出现絮状/块状沉淀

玻片法：检测病毒〔定性〕

试管法：方阵滴定〔半定量〕

Δ环状沉淀反响

测抗原〔法医血迹鉴定〕

Δ免疫透射浊度测定法

检测IgG、IgA、IgM、C3

Δ凝胶扩散〔agarimmunodiffusion〕：可溶性抗原与相应抗体在电解质存在下，在琼脂基质中扩散，当两者相遇，比例恰当时结合，可出现肉眼可见的沉淀线

Δ双扩〔doubleimmunodiffusion〕

原理：可溶性抗原和抗体在含有电解质的琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自向四周凝胶中扩散，当二者相对应时即发生特异性反响，在浓度比例适宜处形成可见的白色沉淀线

方法：①制琼脂板〔3ml1.5%NS琼脂〕

②打孔〔双孔型/三角孔型/梅花孔型〕

③加样〔平孔沿加满〕

④扩散〔37℃，24h观察结果〕

用途：①双孔型：Ag测未知Ab，orAb测未知Ag

②三角孔型：抗原性质分析

③梅花孔型：测Ag有效稀释度

优点：简单、易行、用途广

缺点：敏感性低、出结果慢、只定性，不能定量

Δ单扩〔singleimmunodiffusion〕

原理：将一定量抗体混浇于琼脂内，置于凝胶孔中的定量抗原向四周扩散，抗原与相应抗体在比例适宜处形成白色沉淀环，其大小与抗原浓度成正比

方法：①抗体+琼脂制板，打孔

②在琼脂板小孔中加梯度抗原

③抗原向四周扩散形成沉淀环

④抗原浓度与沉淀环直径呈线性关系，绘制标准曲线

⑤从标准曲线上查出并计算出待测标本含量

用途：定量测定IgG、IgA、IgM、C3等含量

Δ影响电泳的因素

①溶液的pH，常用8~9，蛋白质带负电

②溶液的离子强度，越高，泳动慢，一般0.02~0.2M

③电场强度，越高，越快，一般4~6V/cm〔琼脂长〕，约40V左右

④电渗作用：电场中液体对于一固体的固定相对移动的现象，电渗方向与电泳方向相反

Δ对流免疫电泳〔counter-immunoelectrophoresi