流式细胞仪原理和一般用法.pptxVIP

Partec-ExcellenceinFlowCytometry超出41年研发经验流式细胞仪原理

流式细胞仪使用普通方法及技巧流式细胞仪原理和一般用法专家讲座第1页

Partec-ExcellenceinFlowCytometry超出41年研发经验流式细胞术流式细胞分析，又称流式细胞术（flowcytometry，FCM），是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色单细胞或微粒，测量其产生散射光和发射荧光强度，从而对细胞（或微粒）物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功效状态等进行定性或定量检测一个当代细胞分析技术。他综合了激光技术、计算机技术、半导体技术、流体力学、细胞化学等各门学科。流式细胞仪原理和一般用法专家讲座第2页

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Partec-ExcellenceinFlowCytometry超出41年研发经验特点：（1）单细胞分析。（2）快速分析。（3）多参数相关测量。（4）定性或定量分析细胞。（5）统计学意义显著。（6）分选。流式细胞仪原理和一般用法专家讲座第4页

Partec-ExcellenceinFlowCytometry超出41年研发经验荧光有些物质，当用光照射时，它吸收了该种波长光后还会发射出各种颜色和不一样强度光，而当光停顿照射后，这种发射光也随之消失，这种发射光称为荧光(fluorescence)。荧光波长比吸收光线波长要长些。因为物质分子结构不一样，所吸收光和所发射荧光波长也不一样。被这些物质吸收光称为激发光，产生发射光即荧光。荧光颜色多为红、蓝、绿或黄等。物质荧光有两种，一个是自发性荧光，即组织在短波长光照射下自行发射出荧光。如，组织中蛋白质和脂类在紫外线照射下能发射出微弱淡蓝色荧光。另一个荧光是诱发荧光，即细胞与荧光色素结合后，经一定波长光线照射后发出荧光。惯用是诱发荧光，能产生荧光生物染色剂称为荧光染料(或称荧光色素)。流式细胞仪原理和一般用法专家讲座第5页

Partec-ExcellenceinFlowCytometry超出41年研发经验荧光激发与发射原理能量级激发激发态发射激光能量损失流式细胞仪原理和一般用法专家讲座第6页

Partec-ExcellenceinFlowCytometry超出41年研发经验免疫荧光技术免疫荧光技术是依据抗原—抗体反应原理，先将已知抗原或抗体标识上荧光素，制成荧光抗原或抗体，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检测细胞表面或细胞内对应抗原(或抗体)。从而使形成抗原—抗体复合物上含有标识荧光素，利用流式细胞仪检测标本，荧光素受外来激发光照射而发生明亮荧光(如，黄、绿色或红色等)，经过确定抗原或抗体性质、定位来推断细胞信息，以及利用定量技术测定含量。惯用方法：单抗直接标识流式细胞仪原理和一般用法专家讲座第7页

Partec-ExcellenceinFlowCytometry超出41年研发经验嵌入性染料如DAPI、赫斯特、PI等，直接与细胞内DNA双螺旋结构中A-T碱基对结合，从而使细胞在激发光照射下发特定波长光，经过判断发射光强弱来推算A-T碱基正确多少，从而得知DNA倍性关系。流式细胞仪原理和一般用法专家讲座第8页

Partec-ExcellenceinFlowCytometry超出41年研发经验细胞膜电位、离子、脂类探针现已发觉或开发出来了各种细胞膜电位、各类离子、pH值、脂类探针，利用这些探针在流式细胞仪上可轻易检测各种细胞功效，可实现一些意想不到效果。详细信息，见细胞探针企业网站：www.molecularP流式细胞仪原理和一般用法专家讲座第9页

Partec-ExcellenceinFlowCytometry超出41年研发经验与流式细胞仪相关荧光术语MESF（Moleculesofequivalentsolublefluorochrome）等量可溶性荧光分子：国际标准单位，用来衡量荧光强度自发荧光：细胞或颗粒在激发照射下会发出各种波长荧光。白细胞自发荧光强度为650~1150MESF，血小板及其它颗粒自发荧光更低