食品智能加工技术专业金黄色葡萄球菌革兰氏染色技术72课件.pptx

食品智能加工技术专业金黄色葡萄球菌革兰氏染色技术山东药品食品职业学院

目录目录目录目录目录原理1材料与仪器2方法与步骤3结果报告4

原理原理原理原理原理G+菌的细胞壁主要由肽聚糖组成，其形成的网状结构致密，壁厚，脂类物质含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，通透性降低，从而使结晶紫-碘复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经复染后仍保留初染剂的蓝紫色；G-菌的细胞壁肽聚糖含量低且结构疏松，而脂类物质含量高，当用乙醇脱色处理时，脂类物质被乙醇溶解，细胞壁通透性增大，使结晶紫-碘复合物被洗脱出来，再用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。

材料与仪器材料与仪器材料与仪器材料与仪器1.菌种金黄色葡萄球菌平板培养物。2.染色液和试剂草酸铵结晶紫染色液、路哥氏碘液、0.5%番红染色液、95%乙醇、香柏油、二甲苯。3.仪器和用具普通光学显微镜、接种环、酒精灯、火柴、载玻片、擦镜纸等。

方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤1.制作涂片标本（1）取干净的载玻片，在中央部位加一滴生理盐水。（2）以无菌操作法用接种环取大肠杆菌或金黄色葡萄球菌少许。（3）与载玻片上生理盐水混合均匀，涂成一薄层，直径约为1cm。

方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤2.干燥、固定（1）将涂片放在室温下自然干燥，也可将涂面朝上在酒精灯火焰高处微火烤干。（2）将涂面朝上，将涂片在酒精灯火焰中以钟摆的速度来回移动3-4次，涂片温度以手背触及涂片背面微烫手为宜（不超过60℃），温度过高易破坏细胞形态。

方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤4.初染、水洗（1）滴加结晶紫染液1-2滴到涂面上，以染液刚好覆盖涂面为宜，染色1min。（2）倾去染液，斜置玻片，用细小的水流从载玻片上端缓慢流下，直至流下的水无色为止。水洗时，不要直接冲洗涂面，水流不宜过急，过大，以免涂面薄膜脱落。

方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤5.媒染、水洗（1）将路哥氏碘液1-2滴加到涂面上，以染液刚好覆盖涂面为宜，染色1min。（2）倾去染液，斜置玻片，用细小的水流从载玻片上端缓慢流下，直至流下的水无色为止。

方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤6.脱色、水洗（1）倾斜玻片，连续滴加95%乙醇冲洗脱色，直至流出的乙醇无明显的紫色（一般需20～30s）。（2）倾斜玻片，用细小的水流从玻片上端缓慢流下。

方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤7.复染、水洗（1）将番红染色液1-2滴加到涂面上，以染液刚好覆盖涂面为宜，染色1min。（2）倾去染液，斜置玻片，用细小的水流从载玻片上端缓慢流下，直至流下的水无色为止。

方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤7.干燥、镜检（1）甩去玻片上的水珠后自然晾干；或用吸水纸轻轻吸去水分（不可摩擦）；或在酒精灯火焰高处微火烤干。涂片必须充分干燥。（2）先用低倍镜找到物象，再用高倍物镜找到适当视野，将高倍物镜转出，在涂面上加1滴香柏油，再用油镜观察。

结果报告结果报告结果报告结果报告结果报告报告（1）绘出所观察到的菌种细胞形态图；（2）判定：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。阳性阴性