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青霉素G酰化酶在头孢拉定合成中的作用机制研究

目录

青霉素G酰化酶在头孢拉定合成中的作用机制研究（1）．．．．．．．．．．．4

内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.1.1头孢拉定药物概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.1.2青霉素G酰化酶的生物学特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

1.2.1头孢拉定合成技术研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

1.2.2青霉素G酰化酶在药物合成中的应用研究．．．．．．．．．．．．．．．．．12

1.3研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

1.3.1本研究的目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

1.3.2具体研究内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

2.1.1菌株与酶源．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

2.1.2主要试剂与仪器．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

2.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

2.2.1青霉素G酰化酶的分离纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

2.2.2酶学性质研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

2.2.3头孢拉定合成反应体系构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.2.4产物分析与表征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

3.1青霉素G酰化酶的分离纯化结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

3.1.1酶的纯化流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

3.1.2酶的纯化效果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

3.2青霉素G酰化酶的酶学性质．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

3.2.1最适pH值与温度．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

3.2.2底物特异性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

3.2.3抑制剂影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

3.3青霉素G酰化酶在头孢拉定合成中的作用机制．．．．．．．．．．．．．．．37

3.3.1酶促反应动力学研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

3.3.2中间体分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

3.3.3作用位点的确定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

3.4头孢拉定合成优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

3.4.1反应条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

3.4.2产率提升策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

青霉素G酰化酶在头孢拉定合成中的作用机制研究（2）．．．．．．．．．．47

一、内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

（一）研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．