生化一、二复习主要内容.docxVIP

酶

◆掌握酶的分类、结构和组成，酶与一般催化剂的异同．

◆掌握一些概念：锁钥学说、诱导契合学说、活性中心、反应初速度、Km、酶原、别构酶、同工酶、竞争性抑制，反竞争性和非竞争性抑制、最适pH、最适温度、核酶等.

◆掌握米式方程的推导过程和假设的前题条件，米氏常数Km的意义.

◆熟悉竞争性抑制作用，反竞争性作用和非竞争性抑制作用的定义、动力学方程及特点.

◆掌握别构调节和共价修饰调节作用.

◆熟悉几种解释酶催化作用的机制（邻近效应、定向效应、疏水微环境、酸碱催化，共价催化）.

重点：酶的化学本质、结构、催化特性、催化机制，酶促反应动力学中米氏方程及Km的意义、应用，影响酶促反应动力学的因素。别构酶的特点、同工酶等的概念。

难点：酶催化作用机理、各因素对酶促反应速度的影响及酶促反应动力学的应用，别构酶的概念及特点。

米氏方程与Km值的应用

例1：若要求反应速度达到Vmax的99%，其底物浓度应为？

例2：过氧化氢的Km值为25mmol/L,当底物过氧化氢浓度为100mmol/L时，求在此底物浓度下过氧化氢酶被底物饱和的百分数？

酶活力的计算

例1：淀粉酶活力单位定义为：在最适条件下每小时分解1克淀粉的酶量为一个活力单位。现有1克淀粉酶，用水溶解成1000ml后取1ml测定淀粉酶活力，测得每10分钟分解0.5克淀粉，求总活力。

答：1克酶的总活力=0.5×60÷10×1000=3000（U）/克

例2：例1题中测得淀粉酶制剂的蛋白质含量为0.5mg/mg，求该酶的比活力。

答：1克淀粉酶的总活力为3000U；

1克淀粉酶的总蛋白质量为：0.5mg/mg×1000mg=500mg

比活力=3000÷500=6U/mg酶蛋白

1.某酶在一定条件下，5min内使30mmol底物转变为产物，问该酶的活力（IU）是多少？

2.从某细胞中提取的一种蛋白水解酶的粗提液300ml含有150mg蛋白质，总活力为360单位。经过一系列纯化以后得到的4ml酶制品(含有0.08mg蛋白)，总活力为288单位。请问回收率是多少？1、6mmol/min2、80%

3.从一种植物中得到了粗细胞提取液，每ml含蛋白质32mg，在提取条件下，10ul提取液催化反应速率为0.14umol/min，取50ml提取液，用硫酸铵盐析分析，将饱和度0.3-0.6的沉淀物，再溶于10ml水中，此溶液的蛋白质浓度为50mg/ml，从中取出10ul，测定其反应速度为0.65umol/min。

计算：1、提取过程中，酶的回收百分率;2、酶的提纯倍数。

50ml粗提取液总活力1=0.14×50ml/10ul=700

10ml提纯液总活力2=0.65×10ml/10ul=650

酶的回收百分率=总活力2/总活力1=650/700=93%

粗提取液比活力1=活力单位数/蛋白质=0.14/0.32=0.4375U/mg

提纯液比活力2=活力单位数/蛋白质=0.65/0.5=1.3U/mg

酶的提纯倍数=比活力2/比活力1=1.3/0.4375=2.97倍

作业

1、简述酶作为生物催化剂与一般化学催化剂的共性及个性？

2、影响酶反应效率的因素有哪些?

3、称取25mg蛋白酶配成25ml溶液，取2ml溶液测得含蛋白氮0.2mg，另取0.1ml溶液测酶活力，结果每小时可以水解酪蛋白产生1500μg酪氨酸，假定1个酶活力单位定义为每分钟产生1μg酪氨酸的酶量，请计算：

（1）酶溶液的蛋白浓度及比活力。（2）每克纯酶制剂的总蛋白含量及总活力。

答案：（1）400U/mg（2）2.5×105U/g酶

4、（1）对于一个遵循米氏动力学的酶而言，当[S]=Km时，若V=35μmol/min，Vmax是多少？（70umol/min）

（2）当[S]=2×10-3mol/L，V=40μmol/min，这个酶的Km是多少？

（3）若I表示竞争性抑制剂，KI=4×10-3mol/L，当[S]=3×10-2mol/L和[I]=3×10-3mol/L时，v是多少？（64umol/min）

（4）若I是非竞争性抑制剂，KI、[S]、[I]条件与（3）中相同，v是多少？

答案：（2）1.5×10-3mol/L（4）38.1umol/min

Photohomework

生物膜

重点：

生物膜的组成、结构特点；

生物膜结构与功能的关系；

无机离子、有机大小分子物质的跨膜运输方式。

复习题

1.生物膜的结构与特征

2.被动运输及特点.

3.主动运输及特点.

4.共转运

5.胞吐作用

6.胞吞作用

7.什么是Na+,K+泵，其生理作用是什么?

糖代谢

◆熟悉糖的概念﹑分类以及单糖、二糖和多糖的化