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DB13

河北省地方标准

DB13/T1781—2013

饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测毛细管电泳法

DeterminationofsomekindsofsedativesinfeedsHighperformancecapillaryelectrophoresis-HPCE

发2013-09-05发布2013-09-30实施

发

河北省质量技术监督局

布

河北省标准化管理委员会

I

DB13/T1781—2013

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准主要起草单位：河北省产品质量监督检验院

本标准主要起草人：罗强、王涛、韩光、吕国强、张红玲、田宝勇、白新方

DB13/T1781—2013

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饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测毛细管电泳法

1范围

本标准规定了饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测方法。

本标准适用于饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的毛细管电泳检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB603-2002化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

3原理

样品经乙腈振荡提取后，试液经毛细管电泳，用紫外检测器或二极管阵列检测器在波长257nm处检测，外标法计算各组分含量。

4仪器设备

仪器设备包括：

a)分析天平感量为0.0001g

b)毛细管电泳仪，配有二极管阵列检测器或紫外检测器

c)超纯水机

d)旋涡混合器

e)恒温水浴锅

f)电动离心沉淀器

g)超声波清洗器

5试剂和溶液

除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯试剂，水符合GB/T6682中三级用水规定，电泳用水符合GB/T6682中一级水规定。

6采样

2

DB13/T1781—2013

按照GB/T14699.1的规定执行

7试样制备

按照GB/T20195制备试样，磨碎，全部通过2.8mm孔筛，装入密闭容器中，避光低温保存备用。

8试样溶液的制备

称取磨碎的饲料2.0000g于离心管中，加30.0mL乙腈超声提取30min，3000r离心5min，取上层清液蒸干，然后用4.0mL2%的冰醋酸溶液溶解，混匀，加入2.0mL正己烷，涡动30s～60s，取上层清液，0.45um过滤膜过滤，蒸干，加电泳缓冲液定容至1.00ml。

9检验方法

9.1电泳条件

柱长：37cm；柱温：25℃;工作电压：18kV；检测波长为257nm。缓冲液体系的pH值为8.60。缓冲液体系为44.8mL的磷酸氢二钠，5.2mL的磷酸二氢钠，SDS为0.4325g，甲醇为7.5mL，加入乙腈25μL。且每次运行前，都用0.1mol/L的盐酸冲洗5min，然后用二次蒸馏水冲洗2min，然后用0.1mol/L的氢氧化钠冲洗5min，再用二次蒸馏水冲洗10min，最后用运行缓冲液冲洗5min。每两次进样中间用缓冲液冲洗2min。

9.2定量测定

按照上述电泳条件，做各标准溶液的标准曲线和样品溶液，根据外标法定量，见公式（1）。

试样中各组分含量X%＝（P1×V×ρ)/(P×m×1000)×100…………（1）

式中：

P1——各组分对应的峰面积

V——试样溶液的总体积，mL

ρ——各组分对应的标准溶液浓度，mg/mL

P——各组分对应的标准溶液峰面积

M——试样质量，g

3

DB13/T1781—2013

m

40

5

30

25

20

15

10

5

510

Minutee-257nmBand=10nm

图1四种镇静剂药物毛细管电泳图谱

出峰顺序分别为：t苯巴比妥=3.54min;t艾司唑仑=7.31min;t地西泮=8.17min;t盐酸氯丙嗪

=10.04min。

9.3平行测定结果用算术平均值