《植物细胞培养》课件.pptxVIP

植物细胞培养李昆太江西农业大学

背景资料：大肠杆菌W3110（pEC901）的干扰素受trp启动子调控，当培养基中存在色氨酸时干扰素表达受到阻遏，不存在色氨酸时干扰素基因表达。连续培养表明，当菌体比生长速率较高时重组质粒稳定性高，干扰素的比生产速率也高，但代谢副产物乙酸的比生产速率大大增加。乙酸对大肠杆菌的生长有非竞争性抑制，对干扰苏的生产也有强烈的抑制作用。问1：请画出液体深层发酵的工艺路线图？问2：根据上述菌体生理代谢特性，请问你该怎样实行最优化调控？“发酵工艺的控制”授课内容的实例分析

定义：植物细胞培养包括植物器官、组织、原生质体、胚和植株的培养。它是在植物组织技术上发展起来的，是指在离体条件下培养植物细胞的方法。

至今植物细胞培养已着手研究的植物多达100余种，但进入中试开发或工业生产规模的还仅限于人参、紫草、红豆杉、烟草等为数不多种类。植物细胞培养的应用领域：有用代谢物质的生产；珍贵植物和名贵花卉等种苗的快速繁殖；进行植物细胞遗传、生理、生化和病毒方面的研究。0102

第一节植物细胞培养特性与基本培养基一、植物细胞培养特性与植株栽培相比的优点：不受气候、季节和地域的影响；细胞增殖速度快且产率高；细胞的生长环境可调节控制；选择性地生产所需的代谢产物。植物细胞的代谢产物：糖类、酚类、生物碱等

培养周期长、生长缓慢、生产率低；所需有效成分含量不高；大量培养相对困难，往往不耐剪切、接种量大及放大后产量下降等一系列问题。与微生物细胞相比，植物细胞的不利之处：01诱导驯化获得高产细胞株；优化培养条件；开发新型细胞反应器；采用新的培养技术。解决途径：02

无菌操作；无菌培养的组织：植物细胞、生长点、叶、根、子房、胚珠、花丝、花瓣、花药、花粉等。基本培养技术

01碳源蔗糖是最常用的C源。02氮源有机N源：蛋白水解物、谷氨酰胺或氨基酸混合物。无机N源：NH4+/NO3-更适合植物细胞生长。03磷源三七细胞悬浮培养：初始磷浓度从1.25mM提高到3.75mM，能同时增强细胞生长和皂苷生产。Choi报道：磷浓度从3.7mM提高到11mM，皂苷的含量也随之下降。植物细胞培养的影响因子

生长素和分裂素对细胞生长和次生物质的合成有非常重要的作用，使细胞分裂保持一致。包括植物生长素、细胞激动素、赤霉素和脱落酸等。激素及其类似物1例如，红豆杉产紫杉醇：苯丙氨酸、苯甲酸、N-苯基甘氨酸、甘氨酸和色氨酸前体3金属离子人参和三七悬浮细胞培养：K+和Cu2+2

01生物诱导子：包括经高压灭活的真菌细胞壁提取物、糖原高分子、糖蛋白和低分子有机酸等。非生物诱导子：紫外辐射、重金属离子和一些化学物质。如紫杉醇：甲基茉莉酮酸酯，可显著提高关键酶紫杉二烯合成酶的活性；花生四烯；硫代硫酸银和硝酸银等。诱导子02光对已失去分化的植物细胞来说，虽然光照不是作为能源供给，但是光源、光强和光照时间也会在一定程度上影响细胞的生理代谢，这可能跟光作为一种信号或诱发氧自由基的产生有关。

温度最适温度：22-30℃。pH培养基pH值在灭菌前调至5-6之间，且一般在4-7之间对植物细胞培养影响不大。氧良好的氧供应能提高培养过程的收率。细胞龄植物细胞保存方式往往是愈伤组织（固体）或摇瓶细胞（液体）继代培养。细胞继代周期（即接种细胞的细胞龄大小）对培养往往有很大影响。

选型与开发依据：供氧能力；剪切力；细胞在反应器壁上的附着情况；细胞高浓度培养时的混合状况；温度、pH及营养物质浓度的控制；细胞集团大小的控制；放大的难易程度；维持无菌状态的性能。植物细胞个体大，易形成更大的集块且对剪切力敏感，这是设计和操作植物细胞生物反应器的主要问题。常用的生物反应器：机械搅拌式；气升式123生物反应器的选型、设计和开发第二节植物细胞大量培养技术

气升式反应器：仅依靠鼓气来通气和搅拌，剪切力较低，尤其适合对剪切敏感的植物细胞；但缺点是在高细胞密度时混合效率往往下降。

培养基成分；光照：光照影响许多代谢物的生产；剪切：对剪切力敏感；供氧；气体成分：氧气、二氧化碳、乙烯；黏度；混合等二、反应器操作条件

三、过程开发与反应器操作连续培养在植物细胞培养中没有得到实际应用，但它是研究细胞代谢和动力学等的一种理想手段。两段培养细胞固定化两相培养与过程耦合高密度培养

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