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生物细胞培养科普知识

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目录

CONTENTS

01

基本概念解析

02

培养体系组成

03

标准化操作流程

04

常见问题处理

05

技术应用领域

06

安全与伦理规范

01

基本概念解析

细胞培养定义与分类

细胞培养是指在无菌、适当温度及营养条件下，模拟机体内环境，使细胞在体外生长、繁殖的一种技术。

细胞培养定义

根据培养方式，细胞培养可分为贴壁培养和悬浮培养；根据培养目的，可分为基础研究和应用研究；根据培养细胞种类，可分为原代培养、细胞系、细胞株等。

细胞培养分类

01

02

原代培养与传代培养区别

直接从机体获取的组织或细胞进行首次培养称为原代培养，细胞保持原有特征，但难以长期维持。

原代培养

传代培养

区别

原代培养细胞经传代、扩增后，称为传代培养，细胞适应体外环境，可长期存活并保持特定功能。

原代培养细胞更接近体内状态，适用于药物筛选、毒性检测等；传代培养细胞具有均一性、稳定性，适用于基础研究、细胞治疗等。

常见细胞系应用场景

贴壁细胞系

如成纤维细胞系，适用于细胞生物学研究、细胞黏附与迁移等研究。

悬浮细胞系

如淋巴瘤细胞系，适用于细胞增殖、分化、凋亡等研究。

干细胞系

如胚胎干细胞、成体干细胞，具有自我更新能力，可分化为多种细胞类型，广泛应用于疾病模型建立、药物筛选、细胞治疗等领域。

肿瘤细胞系

如肺癌细胞系、乳腺癌细胞系，具有恶性增殖特性，是研究肿瘤发生、发展、药物敏感性等的重要模型。

02

培养体系组成

培养基核心成分解析

氨基酸

构成蛋白质的基本单元，对细胞生长和分裂至关重要。

01

维生素

作为辅酶参与细胞代谢过程，促进细胞生长和分裂。

02

无机盐

提供细胞所需的矿物质和微量元素，维持细胞渗透压和酸碱平衡。

03

碳水化合物

提供细胞生长和分裂所需的能量。

04

血清选择与替代方案

常用牛血清、羊血清等，含有丰富生长因子和激素，但存在批次差异和病毒污染风险。

动物血清

来源有限，价格昂贵，但成分更接近人体环境，细胞适应性好。

人血清

通过添加人工合成的生长因子和激素替代血清，避免血清带来的问题，但成本较高。

无血清培养基

培养环境参数控制

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细胞生长需要恒定的温度，一般维持在37℃左右。

温度

细胞代谢需要氧气和二氧化碳，通常采用5%CO2的气体环境。

气体环境

细胞需要在适宜的湿度环境下生长，一般保持在95%左右。

湿度

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细胞对光照敏感，需要适当的光照条件，避免过强或过弱的光线影响细胞生长。

光照

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03

标准化操作流程

无菌操作技术规范

确保操作在层流超净台或生物安全柜中进行，佩戴无菌手套和口罩。

无菌环境

物品消毒

无菌操作

所有进入操作区的物品需经过严格的消毒处理，如使用70%乙醇擦拭。

避免任何形式的污染，如触摸培养皿边缘、瓶口等。

使用胰蛋白酶等消化液将贴壁细胞消化下来，制成细胞悬液。

细胞消化

使用细胞计数板进行细胞计数，确定传代后的细胞浓度。

细胞计数

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在显微镜下观察细胞生长状态，确定是否需要传代。

细胞生长状态观察

将细胞悬液接种到新的培养皿中，继续培养。

接种培养

细胞传代操作步骤

冻存与复苏关键要点

01

冻存

将细胞悬液转移到冻存管中，加入适量的冻存液，然后放入程序降温盒中，置于-80℃冰箱或液氮罐中长期保存。

02

复苏

从冰箱或液氮罐中取出细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，然后离心去除冻存液，用新鲜培养基重悬细胞，接种到培养皿中继续培养。

04

常见问题处理

微生物污染识别方法

显微镜检测

生化反应检测

培养基检测

分子生物学检测

通过显微镜观察细胞培养物中是否有细菌、真菌等微生物的存在。

将细胞培养物接种到特定培养基上，观察是否有菌落生长。

利用微生物代谢产生的特定产物进行生化反应，从而识别微生物种类。

利用PCR、测序等技术检测微生物特定基因序列，快速准确识别微生物种类。

细胞状态异常判断

形态学观察

生长特性检测

代谢活性检测

细胞功能检测

通过显微镜观察细胞形态是否正常，如细胞大小、形状、折光性等。

检测细胞生长速度、细胞密度等指标，判断细胞生长状态是否异常。

通过检测细胞代谢产物的种类和数量，判断细胞代谢状态是否正常。

检测细胞特定功能是否正常，如细胞增殖、分化、凋亡等。

实验室环境控制

保持实验室洁净，定期进行消毒和通风，减少微生物污染来源。

严格操作规范

遵循无菌操作原则，使用无菌器材和试剂，避免微生物进入细胞培养体系。

细胞株鉴定

定期对细胞株进行鉴定，确保细胞种类和特性的一致性。

污染物处理

一旦发现细胞培养物受到污染，应立即采取措施进行处理，防止污染扩散。

交叉污染防控策略

05

技术应用领域

疫苗研发生产应用

通过细胞培养技术制备病毒疫苗，如流感病毒疫苗、乙肝病毒疫