基因工程的基本操作程序第4课时课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

基因工程的基本操作程序（第四课时）第3章基因工程人教版高中生物选择性必修3

Bt基因mRNABt抗虫蛋白害虫死亡抗虫棉思考：只有一部分Bt基因能成功导入棉花细胞并表达Bt抗虫蛋白，这需要检测和鉴定才能知道，如何进行检测和鉴定呢?思考：培育转基因抗虫棉的最终目的就是要赋予棉花抗虫特性，怎样检测棉花是否具有抗虫特性呢?

04第四步：目的基因的检测与鉴定

四第四步：目的基因的检测与鉴定①检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质（一）分子水平检测（二）个体生物学水平鉴定方法：抗虫或抗病接种实验PCR等技术——“抗原—抗体杂交技术”之前我们使用过标记基因检测目的基因是否插入，还记得吗？目的基因的检测与鉴定

(1)原理：将目的基因插入含有两种抗生素抗性基因的载体时，如果插入到某种抗生素抗性基因内部，则会导致该抗生素抗性基因失活。如图，目的基因插入到四环素抗性基因内部，则四环素抗性基因失活。延伸：筛选含目的基因的受体细胞（以大肠杆菌为例）

(2)受体细胞可能有：①含目的基因的细菌②含质粒的细菌③含重组质粒的细菌延伸：筛选含目的基因的受体细胞（以大肠杆菌为例）——无抗性——有氨苄青霉素和四环素抗性——有氨苄青霉素抗性

(3)筛选方法：①将转化后的细菌放在含氨苄青霉素培养基上培养，能生长的是含重组质粒的细菌、含质粒的细菌，如图1、2、3、4、5菌落；②再利用灭菌的绒布影印到含四环素培养基上，不生长的即为含目的基因的菌落，如图1、5。最后，可在含氨苄青霉素的培养基上挑取1、5菌落进行培养。延伸：筛选含目的基因的受体细胞（以大肠杆菌为例）

科学家利用基因工程生产人胰岛素过程中所使用的质粒和目的基因的部分结构如下图所示。请回答下列问题：经典题(1)基因工程的核心是基因表达载体的构建，图中质粒上的____________可作为标记基因将含有目的基因的细胞筛选出来。LacZ（β-半乳糖苷酶基因）和AmpR（氨苄青霉素抗性基因）

(4)β-半乳糖苷酶可分解无色的X-gal并产生蓝色的产物，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。将大肠杆菌与基因表达载体混合培养一段时间后，将大肠杆菌接种到添加_____________________的培养基上培养，待长出菌落后，应挑选___________的菌落作为工程菌生产人胰岛素。氨苄青霉素和X-gal白色目的基因插入位点经典题

(4)β-半乳糖苷酶可分解无色的X-gal并产生蓝色的产物，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。将大肠杆菌与基因表达载体混合培养一段时间后，将大肠杆菌接种到添加_____________________的培养基上培养，待长出菌落后，应挑选___________的菌落作为工程菌生产人胰岛素。氨苄青霉素和X-gal白色目的基因插入位点导入重组质粒导入空质粒未导入成功在加入氨苄青霉素和X-gal的培养基中白色活菌蓝色活菌死亡白色经典题

四第四步：目的基因的检测与鉴定①检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质（一）分子水平检测（二）个体生物学水平鉴定方法：抗虫或抗病接种实验PCR等技术——“抗原—抗体杂交技术”PCR和核酸分子杂交技术可更加精准地鉴定受体细胞中是否转入了目的基因！目的基因的检测与鉴定

（一）分子水平的检测

①检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质（一）分子水平检测（二）个体生物学水平鉴定方法：抗虫或抗病接种实验PCR等技术——“抗原—抗体杂交技术”方法：PCR等技术转基因生物提取DNA根据目的基因的序列设计PCR引物PCR操作是否扩增出目的基因电泳什么是电泳？

电泳：在电场的作用下，DNA、RNA、蛋白质等这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。正极负极电场力

电泳：在电场的作用下，DNA、RNA、蛋白质等这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。正极负极电场力

电泳：DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。正极负极电场力电泳常用缓冲液pH8.0～8.3DNA分子在此pH条件下带负电荷若此时电场里没有任何障碍物，所有DNA片段会以同样的速度向正极移动，怎么让它们移动速度不相同呢？

电泳：DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。正极负极电场力电泳常用缓冲液pH8.0～8.3DNA分子在此pH条件下带负电荷若此时电场里没有任何障碍物，所有DNA片段会以同样的速度向正极移动，怎么让它们移动速度不相同呢？琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶是以琼脂糖