T_CVMA 232-2025 猪星状病毒五型荧光PCR检测方法.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMA232—2025

猪星状病毒五型荧光PCR检测方法

Detectionofporcineastrovirustype5fluorescentPCR

2025-4-27发布2025-4-27实施

中国兽医协会发布

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T/CVMA232—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由河南农业大学提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：河南农业大学、河南省科学院、河南省农畜水产品检验技术研究院、牧原食品股份有限公司。

本文件主要起草人：胡慧、魏战勇、李明凤、张越、靳晓慧、史晨曦、夏璐、郑兰兰、刘占通、牛旻、李彦朋、项玉强、孙娟、马世杰、李泽辉、郭东辉、王菲菲。

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猪星状病毒五型荧光PCR检测方法

1范围

本文件规定了猪星状病毒五型感染的荧光PCR检测方法。

本文件适用于对猪星状病毒五型感染的病原学检测及临床病例诊断等，可用于不同样品中猪星状病毒五型的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

bp：碱基对（basepair）

cDNA：互补脱氧核糖核酸（complementarydeoxyribonucleicacid）

Ct值：循环阈值（cyclethreshold）

DEPC：焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）

DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

PAstV5：猪星状病毒五型（porcineastrovirus5）

PBS：磷酸盐缓冲液（phosphatebufferedsaline）

PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）

5临床诊断

5.1流行病学

PAstV5广泛流行于我国猪群中，各日龄均能感染，其中哺乳仔猪和断奶仔猪阳性率最高。PAstV5自发现以来一直是我国PAstV流行的主要基因型。

5.2临床症状

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PAstV5是一种可引起仔猪腹泻的肠道传染病病毒，主要导致仔猪出现呕吐、腹泻，仔猪生长迟缓等症状。患病猪出现上述临床症状时，可作为判断标准之一。

5.3病理变化

小肠上皮细胞局部坏死，绒毛轻微萎缩或脱落。

5.4结果判定

易感动物出现5.2临床症状或5.3病理变化时，可以初步判定为PAstV5疑似病例。确诊应按照NY/T541规定的要求采集样品，并进行实验室检测。

6样品的采集与处理

6.1采样工具

6.1.1器械：解剖刀、剪刀、镊子、药匙、注射器及针头、组织匀浆器等。

6.1.2容器：离心管、样品保存管等。

6.1.3个人防护用具：防护服、防护镜、防护帽、防护靴、口罩、一次性手套等。

6.1.4其他：微孔滤器、采样单、记号笔、防水标签、封口膜、冰袋等。

6.2试剂材料

6.2.10.01mol/LPBS，按照附录A中的A.1配制。

6.2.2青霉素，浓度为10000IU/mL。

6.2.3链霉素，浓度为10000μg/mL。

6.3样品采集

6.3.1组织样品：用无菌剪刀剪取发病仔猪的小肠组织0.5g~1.0g作为待检样品，置于离心管。

6.3.2粪便及肠内容物样品：用无菌的药匙，刮取新鲜粪便及肠内容物，放置于离心管。

6.4样品处理

6.4.1组织样品：采集的肠组织（经剪碎处理），按1:5的比例加入终浓度为100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素的0.01mol/LPBS，反复研磨至糊状，将研磨好的病料反复冻融3次，4℃3000rpm离心20min，上清液用0.22μm微孔滤器过滤，收集样品滤液。

6.4.2粪便及肠内容物样品：采集的粪便或肠内容物，按1:5