T_CVMA 241-2025 爬行动物血细胞人工计数操作规程.docxVIP

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团体标准

T/CVMA241—2025

爬行动物血细胞人工计数操作规程

Manualprocedureforcountingbloodcellsinreptiles

2025-5-19发布2025-5-19实施

中国兽医协会发布

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T/CVMA241—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由北京中农大动物医院有限公司提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：北京中农大动物医院有限公司、中国农业大学、北京农业职业学院。

本文件主要起草人：张雪芳、林嘉宝、刘洋、马文、吕艳丽、夏兆飞。

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爬行动物血细胞人工计数操作规程

1范围

本文件规定了爬行动物各类血细胞识别、人工计数、血细胞比容测定等血液常规指标的检测方法。本文件适用于爬行动物血液学分析。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

红细胞比容packedcellvolume；PCV

红细胞占全血容量的百分比。

3.2

红细胞平均体积meancorpuscularvolume；MCV

单个红细胞的平均体积。

3.3

红细胞平均血红蛋白浓度meancorpuscularhemoglobinconcentration；MCHC

每升红细胞中所含血红蛋白克数。

3.4

红细胞平均血红蛋白量meancorpuscularhemoglobin；MCH

每个红细胞内所含血红蛋白的平均量。

4爬行动物血细胞组成

爬行动物血细胞组成如下：

——红细胞；

——白细胞：异嗜性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞（包括嗜苯胺蓝细胞）；

——凝血细胞。

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5爬行动物血液常规指标

爬行动物血液常规指标包括：

——细胞数量：红细胞计数（RBC）、白细胞计数（WBC）、凝血细胞计数（Thr）；

——白细胞分类计数（各类白细胞所占百分比和绝对值）；

——血红蛋白(HB)；

——红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）。

6准备

6.1器材和试剂

6.1.1器材

显微镜、毛细血管离心机及读卡器、高速离心机、分光光度计、移液器（20μL、100μL、1000μL）、血液混匀仪、Neubauer血细胞计数板和血盖片、带盖的培养皿、滤纸、5mL离心管、棉棒、载玻片、盖玻片、比色皿、擦镜纸、毛细离心管、黏土。

6.1.2试剂

Natt-Herrick’s溶液（可购买或配制，配制方法详见附录A）、Drabkin试剂、瑞氏-吉姆萨染色液、肝素锂抗凝采血管或EDTA抗凝采血管、蒸馏水。

6.2标本准备

6.2.1抗凝剂的选择

抗凝剂的选择如下：

——根据物种和品种选择不同的抗凝剂；

——常用肝素锂和EDTA，若EDTA可能会导致部分爬行动物溶血时，宜选择肝素锂；

——用肝素锂抗凝的爬行动物血液制作血涂片，染色后可能整个背景偏蓝色，且白细胞和凝血细胞有聚集现象。

示例：角鳖（Apalonespinifera）EDTA抗凝血溶血，缅甸蟒（BurmesePython）EDTA和肝素抗凝血没有溶血区别，绿鬣蜥(Greeniguana)EDTA抗凝血无溶血反应。

6.2.2血液标本

血液标本的制备应注意以下事项：

——通常用血量0.5mL~1mL，健康动物血液总量约占体重4%~6%，采集不超10%的血液总量是安全的；

——血液标本应无淋巴液污染，若有淋巴液污染应弃用并重新采集；

——疾病状态下血液量根据动物身体状态灵活选择；

——应采集后用新鲜血液立即制作血涂片；

——如果不能立即对抗凝全血进行检测，应将血保存在4℃,并在采集后的24h内进行检测。

7红细胞计数

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红细胞计数按以下步骤操作：

a)取4mLNatt-Herrick’s溶液到5mL离心管中；

b)吸取20μL混匀抗凝全血，擦拭吸头尖端的外部，将全血打入Natt-Herrick’s溶液中；

c)孵育15min