北师生物选择性必修3生物技术与工程第3章《基因工程》教学课件.pptVIP

*********************************参考资料研究人员与George教授进行讨论*******************************⑶将目的基因导入动物细胞显微注射法将重组DNA显微注射到受精卵中四、目的基因的检测和表达1.目的基因的检测⑴通过特定性状是否表达检测（形态检测）如抗虫、抗病⑵利用基因探针检测用放射性或荧光标记“Southern”印记⑶利用PCR技术检测lacZ基因控制半乳糖酶的合成，使培养基中的物质（X-gal）水解成蓝色，使菌落呈现蓝色补充：利用基因的插入失活(特殊菌落)检测阴性克隆阳性克隆蓝白斑筛选蓝色菌落：阴性克隆白色菌落：阳性克隆目的基因目的基因2.目的基因表达的测定⑴用标记的目的基因做探针，与mRNA杂交“Northern”印记⑵抗体—抗原杂交“Western”印记⑶通过特定性状是否表达判断转基因成功的标志:目的基因在受体细胞表达分（离目的基因）切（割目的基因和载体）接（连目的基因和载体）转（化宿主细胞）筛（选阳性克隆）表（达目的基因）基因工程的应用一、植物基因工程的成果1.突破传统杂交育种的局限性⑴抗虫转基因植物中国自主知识产权的转基因抗虫棉⑵抗病（病毒、细菌、真菌）转基因植物美国培育出转基因抗病葡萄目的基因：几丁质酶基因、抗毒素合成基因等中国863成果之一：转基因抗病水稻⑶抗逆转基因植物目的基因：抗冻基因、耐旱基因、抗盐碱基因、抗除草剂基因等⑷利用转基因改良植物的品质发光烟草澳大利亚科学界培育的紫色转基因石竹花“月影”转基因蓝玫瑰转基因金大米转基因玉米可用于制造血红蛋白转基因烟草可用于生产疫苗的转基因胡萝卜2.利用转基因植物生产药品二、动物基因工程的成果转基因“超级鼠”转（人血清蛋白）基因奶牛生物反应器（乳腺发生器）二、基因工程与疾病治疗1.生产基因工程药品利用基因工程菌等生产的药物有：胰岛素、干扰素、人生长激素、乙肝疫苗等60余种。2.基因治疗将正常的基因导入有基因缺陷的细胞中，使该基因的表达产物发挥功能以达到治疗的目的。分为：体外基因治疗体内基因治疗1986年出生于美国的阿珊蒂患有SCID，身体极易受到致病菌感染，出生后一直生活在无菌玻璃罩里。1990年9月14日，美国医学家从4岁的阿珊蒂体内取出T淋巴细胞，把正常基因（腺苷脱氨酶ADA基因）插入细胞后送回其体内。阿珊蒂接受四次基因治疗，使病情得到根本控制。9岁时的阿珊蒂基因治疗——严重联合免疫缺陷症（SCID）携正常ada基因的细菌克隆得到正常基因以病毒DNA为载体携带正常基因正常基因导入患者细胞将血细胞注射病人体内蛋白质工程治疗病毒感染和肿瘤的干扰素体外保存困难如果将其中的一个半胱氨酸换成丝氨酸，在-70℃可以保存半年天冬氨酸天冬氨酸激酶抑制二氢吡啶二羧酸合成酶赖氨酸玉米中赖氨酸合成过程将天冬氨酸激酶的第352位的苏氨酸变成异亮氨酸，将二氢吡啶二羧酸合成酶第104位天冬酰胺变成异亮氨酸，可以使玉米叶片和种子中赖氨酸含量分别提高5倍和2倍1.蛋白质工程的主要步骤第3位异亮氨酸变成半胱氨酸，与97位半胱氨酸形成二硫键，增加蛋白质的热稳定性T4溶菌酶分离纯化目的蛋白质测定氨基酸序列通过各种手段掌握其空间结构与功能设计编码该蛋白质的基因改造方案改造后基因的转移分离纯化新蛋白质2.蛋白质工程的概念要素：根据蛋白质分子的结构与生物活性、结构与生物功能的关系作基础，通过基因工程手段，对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要3.蛋白质工程的进展和前景难度大，成功实例不多实例：改造的胰岛素成为速效性药品胰岛素将胰岛素B链改为B28Lys－B29Pro，获得单体速效胰岛素正常情况：饭后30～60min，血液中胰岛素的含量达到高峰，120～180min内恢复正常。临床上使用的胰岛素制剂注射后120min后才出现高峰且持续180～240min，与人生理状况不符。实验表明，胰岛素在高浓度（大于10－5mol/L）时以二聚体形式存在，低浓度时（小于10－9mol/L）时主要以单体形式存在。设计速效胰岛素原则就是避免胰岛素形成聚合体。类胰岛素生长因子－I(IGF－I)的结构性质与胰岛素具有高度的同源性和三维结构的相似性，但IGF－I不形成二聚体。IG