沉淀反应课件.pptVIP

免疫學及免疫學檢驗(二)操作步驟1.將抗體和0.9%瓊脂糖50~56℃混合，即刻傾注成平板。2.待凝固後在瓊脂板上打孔，孔中加入已稀釋的抗原溶液和不同濃度的抗原標準品溶液。3.置37℃，讓其向四周自由擴散，24~48h後可見其孔周圍出現沉澱環。免疫學及免疫學檢驗單向免疫擴散試驗示意圖免疫學及免疫學檢驗沉澱環的直徑與待檢標本內含量不是直線關係，有兩種計算方法：(1)Mancini曲線：適用於大分子抗原，擴散時間48h，使用普通座標紙作圖，擴散環直徑平方和濃度呈線性關係。(2)Fehcy曲線：適用於分子抗原，擴散時間較短，使用半對數座標紙作圖，抗原量的對數和擴散圈直徑之間呈線性關係。免疫學及免疫學檢驗雙免疫擴散試驗（doubleimmunodiffusion）雙向免疫擴散試驗是在瓊脂板上按一定距離打數個小孔，在相鄰的兩孔內分別放入抗原和抗體材料。當抗原和抗體向四周凝膠中擴散，在兩孔間可出現2～3條沉澱線，本法常用於抗原或抗體的定性或定量檢測，或用於兩種抗原材料的抗原相關性分析。免疫學及免疫學檢驗雙向免疫擴散試驗示意圖免疫學及免疫學檢驗第三節免疫電泳技術免疫電泳技術是電泳分析與沉澱反應的結合產物。這種技術有兩大優點，一是加快了沉澱反應的速度，二是將某些蛋白組分利用其帶電荷的不同而將其分開，再分別與抗體反應，以此作更細微的分析。免疫學及免疫學檢驗免疫電泳包括:免疫電泳對流免疫電泳火箭電泳免疫印跡等免疫學及免疫學檢驗一）、免疫電泳免疫電泳為區帶電泳與免疫雙向擴散的結合。方法是先將樣品加入瓊脂中利用區帶電泳技術將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。然後在適當的位置上沿電泳方向挖一直線形槽，於槽內加入含有針對各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應抗體進行雙向免疫擴散，可形成多條弧形沉澱線。免疫學及免疫學檢驗免疫學及免疫學檢驗免疫學及免疫學檢驗常用此法進行血清的蛋白種類分析。對於免疫球蛋白缺損或增多的疾病的診斷或鑒別診斷有重要意義。免疫學及免疫學檢驗二）、對流免疫電泳對流免疫電泳實質上是定向加速度的免疫雙擴散技術，其基本原理是：將瓊脂板放入電泳槽內，使瓊脂板的兩孔沿著電場的方向，於負極側的孔內加入抗原，於正極側的孔內加入抗體，通電後，抗原帶負電荷向正極泳動，抗體分子雖也帶負電荷，但因分子量大，向正極的位移小，而受瓊脂中電滲作用向負極移動，抗原和抗體能較快地集中在兩孔之間的瓊脂中形成免疫複合物的沉澱線。只需1小時左右即可觀察結果。免疫學及免疫學檢驗對流電泳示意圖免疫學及免疫學檢驗三）、火箭免疫電泳火箭免疫電泳技術又稱作單向電泳擴散免疫沉澱試驗，它是由單向擴散發展起來的一項定量技術，實質上是加速度的單向擴散。免疫學及免疫學檢驗方法：在含抗體的瓊脂板一端打一排抗原孔；加入待測標本後，將抗原置陰極端，用橫距2～3mA/cm的電流強度進行電泳。抗原泳向陽極，在抗原抗體比例恰當處發生結合沉澱。隨著泳動抗原的減少，沉澱逐漸減少，形成峰狀的沉澱區，狀似火箭。抗體濃度保持不變，峰的高度與抗原量呈正比，用標本中的抗原含量。免疫學及免疫學檢驗火箭電泳圖①②③為標本；④⑤⑥為標準抗原免疫學及免疫學檢驗四）免疫印跡法（immunoblotting）